Name: Trans-vivo Atraso Tipo Ensaio Hipersensibilidade para o Antigen Regulamento Específico (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-02T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 49 s
Description: Aprenda o ensaio trans vivo DTH para avaliar respostas imunes em receptores de transplante usando células mononucleares de sangue periférico. Este método auxilia na decisão de retirada segura da imunossupressão.

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Os autores gostariam de agradecer as contribuições da AM VanBuskirk para o desenvolvimento da nossa compreensão da resposta DTH regulado em receptores de transplante. Este trabalho foi apoiado bolsas NIH PO1AI084853 e R01AI066219-06 e da UE-patrocinado um estudo.

1. Preparação de Linfócitos <ol><li> Coletar sangue para ACD (ácido citrato dextrose) tubos. </li><li> Isolar CMSP a partir de sangue periférico humano fresco, utilizando Meio de Separação de Linfócitos de acordo com métodos padrão. </li><li> Lavar as PBMC três vezes com PBS para remover as plaquetas contaminantes. As plaquetas foram encontrados para interferir com o ensaio de trans-DTH in vivo. Máximo permitido de contaminação de plaquetas preparação PBMC é ≤ 1x10 7 / injeção. </li><li> Se houver uma contaminação de glóbulos vermelhos perceptível, realizar a lise de glóbulos vermelhos usando tampão de lise ACK após a primeira lavagem. Remover tampão ACK por lavagem duas vezes com PBS. </li></ol> 2. Preparação de aloantigénio <ol><li> Isolar CMSP a partir do sangue periférico de doadores utilizando o procedimento indicado acima. </li><li> Ressuspender o doador de PBMC em PBS a uma concentração de 120x10 6 células / ml (4x10 6 células / 30 ul). </li><li> Adicionar 1 uM de PMSF, à mistura de proteína para evitardegradação. </li><li> Sonicar a suspensão de células utilizando sete impulsos de 1 segundo, com uma sonda de ultra-sons 2 mm. (Nota: Mantenha o material frio e evitar bolhas excessivas Se ocorrer a formação de espuma, deixe a suspensão de células sentar-se no gelo por um 2-3 min.). </li><li> Verifique o rompimento de&gt; 90% das células utilizando um hemocitómetro. </li><li> Centrifugar a mistura a 14000 rpm a 4 ° C durante 20 minutos em microcentrifuga refrigerado. </li><li> Transfira o sobrenadante para um novo tubo ml seguro-lock 2.0 e determinar a concentração de proteína. </li></ol> 3. Preparação de células para Injectáveis <ol><li> Para cada alíquota injeção 7x10 6 PBMC em ml tubos seguro-lock 2.0. </li><li> Centrifugar a 6000 rpm, durante um minuto, em microcentrifuga e remover o sobrenadante. </li><li> Ressuspender as células em PBS com ou sem antigénios. Ajustar o volume de injecção de 35 ul com PBS. O esquema a seguir é usado para injeções: Controle Negativo: PBMC + PBS Controlo positivo: PBMC + TT / DT (25 e mu, G / injecção) Experimental Antigénio Específico da resposta: teste de CMSP + Ag (4-8 ug / injecção) Antígeno Experimental Regulamento Específico: PBMC + teste Ag + TT / DT </li></ol> 4. Pré-medição, Injection, e Pós-medição <ol><li> Anestesiar CB17 rato SCID com isoflurano. Medir a espessura da pata traseira usando uma mola paquímetro. Coloque o cursor no centro da almofada da pata, com uma borda de tocar no último andar da almofada do pé, para proporcionar um ponto de referência para manter o local de medida consistente. Espessura da pata é registrado quando a leitura calibre estabilizou. </li><li> Lentamente injetar suspensões de células por via subcutânea em coxim plantar de camundongos usando ½ cc seringas de insulina com agulha de calibre 28. Realize injeção com a agulha apontando para os dedos dos pés, e o bisel voltado para cima. (Nota: verifique se não há nenhum vazamento). </li><li> 18-24 horas após a injeção, anestesiar rato com medição isoflurano e repetição da pata inchaço. </li><li> Subtractuar a espessura de cada almofada da pata antes da injecção, a partir do valor pós-injecção para se obter o valor de inchaço da almofada da pata, expressa os dados em unidades de 10 polegadas -4. Calcular o antigénio específico do líquido inchaço subtraindo o inchaço da almofada da pata de controlo (CMSP + PBS) a partir dos valores de inchamento coxins plantares obtidos a partir dos tratamentos de (PBMC + dador aloantigénio, TT / DT ou dador aloantigénio + TT / DT). A resposta de controle positivo para recordar antígeno TT / DT de ≥ 25x10 -4 polegadas sobre a resposta de fundo à PBS é necessário para que o teste seja considerado válido. </li><li> Determinar a inibição de respostas de recolha, na presença de antigénios do dador através da comparação do inchaço líquido de cada injecção com a seguinte fórmula: <img alt="Equação 1" fo:src="/files/ftp_upload/4454/4454eq1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4454/4454eq1.jpg" /></li></ol>

<ol><li>Carrodeguas, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trans+vivo+analysis+of+human+delayed-type+hypersensitivity+reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Trans vivo analysis of human delayed-type hypersensitivity reactivity.</a> Hum. Immunol. 60, 640-651 (1999).</li>
<li>VanBuskirk, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+allograft+acceptance+is+associated+with+immune+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Human allograft acceptance is associated with immune regulation.</a> J. Clin. Invest. 106, 145-155 (2000).</li>
<li>Burlingham, W. J., Jankowska-Gan, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+strain+and+injection+site+are+crucial+for+detecting+linked+suppression+in+transplant+recipients+by+trans-vivo+DTH+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Mouse strain and injection site are crucial for detecting linked suppression in transplant recipients by trans-vivo DTH assay.</a> Am. J. Transplant. 7, 466-470 (2007).</li>
<li>Burlingham, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+tolerance+to+a+maternal+kidney+transplant+is+selective+for+HLA+class+II%3A+Evidence+from+trans-vivo+DTH+and+alloantibody+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Immunology%22%5BJournal%5D)">Loss of tolerance to a maternal kidney transplant is selective for HLA class II: Evidence from trans-vivo DTH and alloantibody analysis.</a> Human Immunology. 61, 1395-1402 (2000).</li>
<li>Geissler, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+liver+allograft+acceptance+and+the+%27tolerance+assay%27%3A+In+vitro+anti-donor+T+cell+assays+show+hyporeactivity+to+donor+cells+but%2C+unlike+DTH%2C+fail+to+detect+linked+suppression%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Human liver allograft acceptance and the 'tolerance assay': In vitro anti-donor T cell assays show hyporeactivity to donor cells but, unlike DTH, fail to detect linked suppression.</a> Transplantation. 72, 571-580 (2001).</li>
<li>Jankowska-Gan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+liver+allograft+acceptance+and+the+%27tolerance+assay%27.+II.+donor+HLA-A%2C+-B+but+not+DR+antigens+are+able+to+trigger+regulation+of+DTH%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human liver allograft acceptance and the 'tolerance assay'. II. donor HLA-A, -B but not DR antigens are able to trigger regulation of DTH.</a> Hum. Immunol. 63, 862(2002).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minor+H+Antigen+HA-1-specific+Regulator+and+Effector+CD8%2B+T+Cells%2C+and+HA-1+Microchimerism%2C+in+Allograft+Tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Minor H Antigen HA-1-specific Regulator and Effector CD8+ T Cells, and HA-1 Microchimerism, in Allograft Tolerance.</a> J. Exp. Med. Cai, J., et al. 199, 1017-1023 (2004).</li>
<li>Rodriguez, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+regulation+and+graft+survival+in+kidney+transplant+recipients+are+both+enhanced+by+human+leukocyte+antigen+matching%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Immune regulation and graft survival in kidney transplant recipients are both enhanced by human leukocyte antigen matching.</a> Am. J. Transplant. 4, 537-543 (2004).</li>
<li>Xu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+CD4%2BCD25low+adaptive+T+regulatory+cells+suppress+delayed-type+hypersensitivity+during+transplant+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human CD4+CD25low adaptive T regulatory cells suppress delayed-type hypersensitivity during transplant tolerance.</a> J. Immunol. 178, 3983-3995 (2007).</li>
<li>Derks, R. A., Jankowska-Gan, E., Xu, Q., Burlingham, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cell+type+determines+the+mechanism+of+bystander+suppression+by+adaptive+T+regulatory+cells+specific+for+the+minor+antigen+HA-1%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Dendritic cell type determines the mechanism of bystander suppression by adaptive T regulatory cells specific for the minor antigen HA-1.</a> J. Immunol. 179, 3443-3451 (2007).</li>
<li>Jankowska-Gan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+reduction+of+immunosuppression+in+older+renal+transplant+recipients+who+exhibit+donor-specific+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Successful reduction of immunosuppression in older renal transplant recipients who exhibit donor-specific regulation.</a> Transplantation. 88, 533-541 (2009).</li>
<li>Jankowska-Gan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretransplant+immune+regulation+predicts+allograft+outcome%3A+bidirectional+regulation+correlates+with+excellent+renal+transplant+function+in+living-related+donor-recipient+pairs%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Pretransplant immune regulation predicts allograft outcome: bidirectional regulation correlates with excellent renal transplant function in living-related donor-recipient pairs.</a> Transplantation. 93, 283-290 (2012).</li>
<li>Knechtle, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+and+limited+use+of+tacrolimus+to+avoid+rejection+in+an+alemtuzumab+and+sirolimus+regimen+for+kidney+transplantation%3A+clinical+results+and+immune+monitoring%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Early and limited use of tacrolimus to avoid rejection in an alemtuzumab and sirolimus regimen for kidney transplantation: clinical results and immune monitoring.</a> Am. J. Transplant. 9, 1087-1098 (2009).</li>
<li>Haynes, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donor-specific+indirect+pathway+analysis+reveals+a+B-cell-independent+signature+which+reflects+outcomes+in+kidney+transplant+recipients%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Donor-specific indirect pathway analysis reveals a B-cell-independent signature which reflects outcomes in kidney transplant recipients.</a> Am. J. Transplant. 12, 640-648 (2012).</li>
<li>Burlingham, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-17-dependent+cellular+immunity+to+collagen+type+V+predisposes+to+obliterative+bronchiolitis+in+human+lung+transplants%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">IL-17-dependent cellular immunity to collagen type V predisposes to obliterative bronchiolitis in human lung transplants.</a> J. Clin. Invest. 117, 3498-3506 (2007).</li>
<li>Bobadilla, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TH-17%2C+Monokines%2C+Collagen+Type+V%2C+and+Primary+Graft+Dysfunction+in+Lung+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">TH-17, Monokines, Collagen Type V, and Primary Graft Dysfunction in Lung Transplantation.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 177 (6), (2008).</li>
<li>Olson, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+prostate+tumor+antigen-specific+CD8%2B+regulatory+T+cells+are+inhibited+by+CTLA-4+or+IL-35+blockade%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human prostate tumor antigen-specific CD8+ regulatory T cells are inhibited by CTLA-4 or IL-35 blockade.</a> J. Immunol. 189, 5590-5601 (2012).</li>
</ol>

Os autores deste manuscrito não têm conflitos de interesse de divulgar.

O ensaio de DTH trans in vivo é um teste de diagnóstico de novo com uma aplicação potencial clínico para avaliar as respostas mediadas por células em transplantes, cancro e pacientes auto-imunes. É importante porque não só é útil no monitoramento de recall T efetoras respostas, mas também pode detectar respostas T reguladoras. A maneira confiável para detectar regulação DTH humano pode prever a segurança da retirada da imunossupressão em pacientes que são candidatos à monoterapia ou tolerância ensaios. <p class="jov...

<table><tbody><tr><td>Tubo ACD para coleta de sangue</td><td>BD</td><td>02-684-26</td><td></td></tr><tr><td>Meio de Separação de Linfócitos</td><td>Cellgro</td><td>25-072-CV</td><td></td></tr><tr><td>Salina Fosfato Tamponada de Dulbecco</td><td>Cellgro</td><td>21-031-CM</td><td>Sem cálcio &amp;& magnésio</td></tr><tr><td>Tampão de lise ACK</td><td>BioWhittaker</td><td>10-548E</td><td></td></tr><tr><td>TT/DT ou EBV</td><td>Sanofi Pasteur Inc./ Meridian Life Science, Inc.</td><td></td><td>TT/DT 25 &amp;mu;g/injeção EBV 8 &amp;mu;g/injeção</td></tr><tr><td>Inibidor de protease PMSF</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>78830</td><td></td></tr><tr><td>Eosina para contagem de células</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E-6003</td><td></td></tr><tr><td>Aloantígeno</td><td></td><td></td><td>Antígenos HLA purificados, peptídeos alo-sintéticos podem ser usados em vez de lisados livres de células doadoras</td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga estéreis de 50 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-443-18</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas de 10 ml e pipetador</td><td>BD Falcon</td><td>13-675-20</td><td></td></tr><tr><td>tubos seguros de 2 ml</td><td>Costar</td><td>3213</td><td></td></tr><tr><td>1000 &amp;mu;l, 100 &amp;mu;l, 10 &amp;mu;pipetas com ponteiras estéreis</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hemocitômetro</td><td>Fisher</td><td>02-671-10</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga de tamanho completo e microcentrífuga</td><td>Beckman Coulter/Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Seringas de insulina de 1/2 cc ou 1 cc</td><td>Becton Dickinson</td><td>14-826-79</td><td>28 gauge</td></tr><tr><td>Sonicador Vibracell</td><td>Divtech Equipment Co. Sonocs Materials Inc</td><td></td><td>sonda de 2 mm</td></tr><tr><td>Medidor de espessura de disco</td><td>Mitutoyo, Japão</td><td></td><td></td></tr><tr><td>camundongos SCID</td><td>Harlan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Piramal Healthcare</td><td></td><td>Anestesia inalatória</td></tr></tbody></table>

trans-vivo atraso tipo ensaio hipersensibilidade para o antigen regulamento específico

Trans-vivo Delayed Type Hypersensitivity Assay for Antigen Specific Regulation

Resposta de hipersensibilidade do tipo retardado (DTH) é um rápido em manifestação in vivo da resposta imunitária dependente da célula T a um antigénio exógeno (Ag), de que o sistema imunitário do hospedeiro tem tido no passado recente. Reacções DTH são frequentemente dividido numa fase de sensibilização, referindo-se a experiência inicial de antigénio, e uma fase de desafio, o que geralmente resulta de vários dias após a sensibilização. A falta de uma resposta de hipersensibilidade tardia a um Ag recuperação demonstrada pelo teste de pele é frequentemente considerado como uma evidência de anergia. O ensaio de DTH tradicional tem sido usado eficazmente no diagnóstico de várias infecções microbianas. Apesar partilhando características imunológicas similares, tais como a infiltração de linfócitos, edema e necrose do tecido, o DTH directa não é uma técnica viável de diagnóstico em doentes transplantados, devido à possibilidade de injecção directa, resultando na sensibilização para antigénios do dador e perda do enxerto. Para evitar este problema, o zumbidoum-para-rato de &quot;trans-vivo&quot; ensaio de DTH foi desenvolvido 1,2. Este teste é, essencialmente, um ensaio de transferência de DTH, em que as células mononucleares de sangue periférico humano (PBMC) e antigénios específicos foram injectados por via subcutânea na pata traseira ou pinas de um rato ingénuos e DTH-como inchaço é medido após 18-24 h 3. A apresentação de antigénio por células apresentadoras de antigénios humanos, tais como macrófagos ou células dendríticas para as células T no tecido altamente vascularizado rato desencadeia a cascata inflamatória e atrai as células imunes do rato, resultando em respostas do inchaço. A resposta é específica para o antigénio e requer sensibilização antigénio antes. Uma resposta DTH dador reactivo positivo no ensaio de DTH Tv reflecte que o paciente de transplante desenvolveu uma disposição imunológica pró-inflamatória para aloantigénios de garfo. A característica mais importante deste ensaio é que ele pode também ser usado para detectar células T reguladoras, que causam a supressão de espectador. Supressão de um espectadorSensibilidade resposta DTH na presença do antigénio do doador é característico dos receptores de transplante com aloenxertos aceites 2,4-14. O monitoramento de pacientes transplantados para alloreactivity e regulação por Tv-DTH pode identificar um subgrupo de pacientes que poderiam se beneficiar de redução da imunossupressão sem risco elevado de rejeição ou de deterioração da função renal. Uma área promissora é a aplicação do ensaio de DTH em Tv-vigilância da autoimunidade 15,16 e também na área da imunologia tumoral 17.

1. Avaliação dos receptores de transplante renal para a resposta antígeno-específica de doadores usando ensaio Tv-DTH Para testar o doador reactivo imunidade celular em pacientes transplantados renais foram injetados PBMC de pacientes com estes antigénios do dador, isoladamente ou com um antigénio de toxóide do tétano (TT). Como um controlo positivo de células foram injectadas com o TT por si só. Observamos três padrões principais de tipo de hipersensibilidade retardada em receptores de transpl...

Descreve-se um ensaio de diagnóstico potencialmente valiosa, que pode ser utilizada para decidir a retirada da imunossupressão após transplante sem risco elevado de rejeição do enxerto. O ensaio utiliza os princípios do tipo hipersensibilidade cutânea tardia e fornece uma avaliação precisa do dador respostas imunes efetoras e reguladoras específicas montadas pelos destinatários.

Trans-vivo Atraso Tipo Ensaio Hipersensibilidade para o Antigen Regulamento Específico

A resposta de hipersensibilidade tardia (DTH) é uma manifestação rápida in vivo da resposta imune dependente de células T a um antígeno (Ag) estranho que o hospedeiro ...

O objetivo geral deste procedimento é utilizar o ensaio DTH trans vivo para monitorar respostas específicas a antígenos pró e anti-inflamatórias em seres humanos. Primeiro, isole as células mononucleares do sangue periférico do sangue periférico do ser humano. Em seguida, misture a preparação de PBMC com PBS.Antígeno de teste de lembrança e antígeno de teste mais antígeno de lembrança. Prossiga com as medições prévias na almofada plantar e injete as misturas preparadas em camundongos. Repita as medições nas almofadas plantares 24 horas depois. Três.Padr&otilde;es definitivos de respostas de hipersensibilidade tardia podem ser regulat&oacute;rios, n&atilde;o regulat&oacute;rios e sensibilizados. O ensaio de hipersensibilidade tardia trans vivo pode ser aplicado para determinar par&acirc;metros cl&iacute;nicos, como respostas aloreativas, em que a fonte do ant&iacute;geno s&atilde;o as c&eacute;lulas do doador do transplante. A principal vantagem desta t&eacute;cnica em rela&ccedil;&atilde;o aos m&eacute;todos in vitro existentes &eacute; que &eacute; poss&iacute;vel detectar facilmente tanto respostas pr&oacute;-inflamat&oacute;rias quanto regulat&oacute;rias a ant&iacute;genos alo, autoant&iacute;genos ou ant&iacute;genos tumorais, utilizando um &uacute;nico sistema de ensaio.Egon, um pesquisador do meu laboratório, demonstrará agora o pr

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Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

De hipersensibilidade do tipo retardado (DTH) é uma reação inflamatória mediada por CCR7 efetuador linfócitos T de memória. Aqui demonstramos como induzir DTH ativa em ratos Lewis e monitorar a resposta inflamatória.

Indução e Monitoramento de hipersensibilidade do tipo retardada Ativa (DTH) em ratos

De hipersensibilidade do tipo retardado (DTH) é uma reação inflamatória mediada por CCR7-efetoras de memória T (TEM) linfócitos. Aqui demonstramos como ativar células antígeno-específicas TEM, induzir DTH adotivos em ratos Lewis e monitorar a resposta inflamatória.

Indução e Monitoramento de hipersensibilidade tardia-Type Adoptive em Ratos

Tregs são potentes supressores do sistema imune. Há uma falta de marcadores de superfície única para defini-los, portanto, definições de Tregs são principalmente funcionais. Aqui nós descrevemos um...

Humano In Vitro Supressão como ferramenta de triagem para o reconhecimento de um Estado precoce de desequilíbrio imunológico

O vídeo demonstra um método imunológico para monitorar in vivo a produção de linfócitos T citotóxicos induzidos por adjuvantes ou CTL. Um camundongo é pré-injetado com linfócitos T CD8 + de doadores proliferativos corados com corante geneticamente modificado. A injeção subcutânea de ovalbumina com adjuvantes gera linfócitos T CD8+ citotóxicos que são identificados pós-colheita por meio de imunomarcação e citometria de fluxo.

Uma técnica imunológica para monitorar a geração de linfócitos T citotóxicos mediados por adjuvantes

Apresentamos aqui um método para desenvolver células T reguladoras (Tregs) específicas de antígeno funcional (Ag) a partir de células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs) para imunoterapia de artrite autoimune em um modelo murino.

Desenvolvimento de Células-Tronco de derivados de células T regulatórias antígeno específico da Contra Auto-imunidade

Este artigo descreve um método para medir a aloreactividade numa população mista de células T utilizando citometria de fluxo de imagem.

Medição do T celular aloreactividade usando imagens de Citometria de Fluxo

Aqui, apresentamos um protocolo para induzir a tolerância em transplante e avaliar in vitro e em vivo a capacidade supressora de subconjuntos distintos celular do destinatário e o status imune do destinatário para doador ou antígenos exógenos.

In Vitro e In Vivo de avaliação da atividade supressiva, T, B e células mieloides e respostas Humoral de pacientes transplantados

O objetivo do presente protocolo é permitir detecção de in vivo matando de uma célula-alvo em um modelo murino de antígeno-específicas.

Na Vivo Ensaio para detecção de células T antígeno-específicas função citolítica usando um modelo de vacinação

Aqui apresentamos um protocolo para o aumento in vivo da ininvitro-homing indução de células T regulamentares. Neste protocolo, as células dendríticas são projetadas para produzir localmente altas concentrações da vitamina D ativa (1,25-dihidroxivitamina D ou 1,25[OH]2D) e a vitamina A ativa (ácido retinoico ou AR) de novo.

In Vivo Aumento da Indução de CélulaS T Reguladoras de Gut-Homing

O estudo demonstra o papel da pele na modulação das respostas imunes em camundongos por meio da imunização epicutânea (EC). A imunização contra CE com um antígeno proteico pode suprimir as respostas imunes na hipersensibilidade de contato ou reverter a supressão induzida pela pele quando combinada com padrões moleculares associados a patógenos. A imunização contra a CE mostra-se promissora como uma abordagem eficaz e sem agulha para a imunoterapia.

Modelo Murino de Imunomodulação Induzida por Epicutâneo

Aprenda o ensaio trans vivo DTH para avaliar respostas imunes em receptores de transplante usando células mononucleares de sangue periférico. Este método auxilia na decisão de retirada segura da imunossupressão.

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