Isolamento e excisão de Murino Aorta; A técnica versátil no Estudo de Doenças Cardiovasculares

O objetivo geral deste procedimento é esterlina, isolar e excisar a aorta murina. Isso é feito expondo primeiro a cavidade torácica e abdominal. O segundo passo é perfundir com solução salina fria e estéril.

Em seguida, os órgãos das cavidades torácica e abdominal são removidos, deixando o coração preso à aorta. A etapa final é extirpar o tecido adiposo perivascular e o tecido advento da aorta. Em última análise, um microscópio de dissecação é usado para verificar se todo o tecido circundante é removido, e a aorta pode ser usada para uma variedade de análises experimentais.

Portanto, essa técnica é útil para responder a questões-chave no campo da pesquisa cardiovascular, como o desenvolvimento de aneurismas e a formação de placas ateroscleróticas. E então você pode olhar para eles observando as mudanças na biologia molecular, como a expressão gênica e proteica. Depois de sacrificar o mouse, verifique o estado eutanasiado por um beliscão no dedo do pé.

Em seguida, esterilize a pele umedecendo o pelo abdominal com etanol a 70%. Em seguida, prenda o mouse na placa cirúrgica em decúbito dorsal com os apêndices estendidos. Comece a cirurgia usando uma pinça para localizar e isolar a pele abdominal logo abaixo do processo xifóide.

Em seguida, levante a pele e corte-a com uma tesoura. Isso deve expor a porção superior do peritônio e a cavidade torácica inferior. Em seguida, usando fórceps e tesoura, levante o processo xifóide e faça incisões laterais logo abaixo a ele ao longo das margens subcostais.

Para dissecar a cavidade torácica, entre pelo diafragma, tomando cuidado para não danificar o coração ou quaisquer vasos importantes no processo. Agora cranial estendem as incisões laterais ao longo das margens subcostais. Assim, remova a porção anterior da caixa torácica.

Uma dissecção romba para remover o coração da parede torácica anterior pode ser necessária para completar essas incisões. Agora, usando gaze, limpe a cavidade torácica do excesso de líquidos para facilitar o acesso aos órgãos. Em seguida, remova os pulmões usando uma pinça e uma tesoura lóbulo por lóbulo.

O coração e a aorta devem então ser totalmente expostos e facilmente acessados para coletar sangue por meio de uma punção cardíaca. Faça isso agora antes de prosseguir com a perfusão para perfundir o coração, encha uma seringa de 10 cc com 10 mililitros de um XPBS estéril gelado. Em seguida, coloque uma agulha de calibre 25.

Insira cuidadosamente a agulha no ventrículo esquerdo. Em seguida, faça uma incisão no átrio direito para que a pressão excessiva não se acumule no sistema circulatório na próxima etapa. Agora, nos próximos dois a três minutos, ejete lentamente o PBS da seringa para o coração.

Durante a ejeção do PBS, use gaze estéril para absorver o fluido que sairá do átrio na incisão. Quando o PERFUSE oito estiver todo ejetado, absorva qualquer fluido restante com gaze que obscureça uma visão limpa da cavidade torácica. Para expor o conteúdo gastrointestinal, corte coddly através da parede abdominal, estendendo a incisão para a área suprapúbica.

Uma vez lá, corte bilateralmente em direção aos membros inferiores para fazer um retalho cutâneo, que pode ser fixado ou excisado. Seguir em frente remove vários órgãos, os lobos do fígado, o pâncreas, o baço, os intestinos e a parte inferior do esôfago. Isso abre a visão para a aorta.

Tenha muito cuidado ao dissecar a região perren, pois há ramos superficiais da aorta para as artérias renais nessa região. Faça essa dissecção com precisão e cuidado, pois as bactérias do GI podem contaminar os outros tecidos, enxágue a área desobstruída com um XPBS e absorva o excesso de solução com gaze, a aorta deve ser facilmente acessada. Assim, com tesouras e pinças, separe a aorta da coluna.

Uma dissecção romba é apropriada, e o uso de um microscópio de dissecação é fortemente recomendado. A aorta pode ser removida, começando coddly ou cran. O que importa é um processo ordenado de limpeza e separação de tecidos.

Ao dissecar o tecido adiposo perivascular, remova-o com microtesouras finas para evitar danos à parede aórtica. Isso minimiza a chance de contaminação por fibroblastos ao cultivar células musculares lisas da aorta. A excisão cuidadosa do tecido adiposo perivascular e da adventícia é muito importante.

Qualquer tecido restante pode causar contaminação na cultura de células, mas também influenciar seus ensaios moleculares. Usando este procedimento, uma aorta intacta originada do coração desce para as cavidades torácica e abdominal. Com as artérias renais ainda aderidas, a aorta pode ser visualizada in situ para quantificar as alterações morfométricas, que são diagnósticas no estudo dos aneurismas da aorta abdominal.

Posteriormente, a aorta pode ser removida, fixada e corada para observar as alterações histológicas, como a coloração de hemat, toin e eoin, ou com a coloração de Hoff Van Geen para observar as bandas de elastina e, assim, visualizar a integridade estrutural da aorta. As células aórticas também podem ser usadas para isolamento de células primárias e para estudos in vitro, como estudos de viabilidade e localização de proteínas. Após o procedimento, você pode usar outras técnicas, como isolamento de proteínas e RNA, para observar a expressão de proteínas, a atividade enzimática e a expressão gênica.