Técnicas de processamento Olhos implantados com uma Retinal Prosthesis para localizada análise histopatológica: Parte 2 Epirretiniana implantes com tachas da retina

As próteses retinianas com componentes de metal duro não são compatíveis com os processos histológicos tradicionais. Aqui descrevemos técnicas para avaliar a saúde do olho diretamente adjacente a um implante de retina fixado epirretiniana com um metal T. Isso é feito primeiro nucleando e fixando o olho de acordo com o protocolo descrito em um vídeo complementar e, em seguida, dissecando uma amostra de tecido, que inclui o implante e o T da retina. a orientação desejada usando um processo de incorporação em duas etapas. Em seguida, o bloco de resina final é montado em um suporte especial e retificado gradualmente até que uma seção transversal através do implante e do tecido ocular circundante seja exposta no nível desejado.

A etapa final é a coloração superficial do tecido exposto e, em seguida, a imagem e a fotografia com um microscópio de dissecção de alta potência para visualizar a arquitetura celular adjacente à prótese implantada. Essas etapas são repetidas várias vezes, conforme necessário. Por fim, uma série de imagens transversais através da amostra de tecido, incluindo o implante in situ, são coletadas e podem ser usadas para refinar o design do dispositivo ou cirurgia, bem como auxiliar na avaliação da segurança da prótese específica.

A principal vantagem dessa técnica em relação aos métodos existentes, como a histologia de corte tradicional baseada em lâmina, é que os objetos implantados no coração, incluindo componentes metálicos, podem permanecer in situ durante o procedimento, permitindo a visualização da interface do tecido do implante. Este método pode responder a questões-chave no campo da prótese retiniana, como avaliar a integridade estrutural do delicado tecido ocular adjacente a uma prótese retiniana implantada. Após a enucleação do olho e a fixação, conforme descrito em um vídeo JoVE complementar, visualize o implante e o ponto onde ele está preso à parte externa do olho.

Usando uma lâmina de 15 graus. Faça uma incisão circunferencial transcorneana e remova a tampa da córnea para revelar o interior do globo ocular. Observe que a lente foi removida anteriormente durante a vitrectomia por lensectomia, que faz parte do procedimento cirúrgico para este implante epirretiniano.

Em seguida, desinser, insira a íris e quaisquer fibras Z residuais do cristalino para revelar a câmara posterior com o implante epirretiniano e o metal T in situ. Dependendo do implante e do estudo que está sendo realizado, remova os componentes estranhos antes de uma dissecção adicional. No presente exemplo, a matriz epirretiniana que está sendo avaliada consiste em um protótipo hermético, eletrodo de diamante e pacote eletrônico alojado em um suporte de silicone conformado.

Disseque cuidadosamente uma amostra que inclua a aderência e o tecido circundante na orientação desejada. Use uma tesoura de dissecção fina para cortar tiras de espessura total da parte de trás do olho, incluindo esclera, coróide e retina. Aqui, extraia cuidadosamente o pacote de eletrodos de diamante por dissecção fina com o bisturi.

Deixe o corpo de silicone do implante junto com a aderência da retina e os restos da fiação de platina. Pegue uma amostra que dê uma seção transversal longitudinal da aderência mostrando todas as camadas da retina adjacentes à aderência. Em seguida, retorne a amostra para 70% de etanol.

Desidratar a amostra durante três dias em estágios progressivos de etanol. Primeiro, desidrate a amostra em etanol 70% por duas horas, duas vezes. Em seguida, desidrate a amostra em etanol a 80% por duas horas duas vezes e, em seguida, durante a noite no dia seguinte, desidrate a amostra em etanol a 90% por duas horas duas vezes, prossiga para desidratar a amostra em etanol a 100% por duas horas duas vezes e depois durante a noite.

Finalmente, desidrate a amostra em acetona 100% por duas horas duas vezes. Remova a amostra da acetona e observe-a sob um microscópio de luz enquanto seca ao ar à temperatura ambiente. A remoção do líquido dos tecidos moles resulta em colapso das células e encolhimento.

A amostra será transferida para epóxi pouco antes de começar a enrolar e colapsar. Uma apreciação de quando ocorre o enrolamento e o colapso do tecido é desenvolvida com a experiência. Para embutir a amostra em resina epóxi transparente, mergulhe o tecido ocular em epóxi liquefeito em um recipiente lacrado apropriado.

Desgaseifique suavemente o epóxi em uma câmara de vácuo e deixe-o durante a noite em temperatura ambiente para curar. Tome cuidado para incorporar a amostra na orientação desejada, redimensionando o epóxi curado e a amostra com uma serra de fita e palheta O bloco redimensionado contendo o tecido ocular em epóxi liquefeito fresco, de modo que o eixo longo da aderência seja orientado paralelamente à parte inferior do molde. Use um ponto de super cola para prender a amostra de redimensionamento na parte inferior do suporte de amostra.

Encher o porta-amostras com epóxi liquefeito e desgaseificar como antes, deixar curar durante a noite. Em seguida, monte a resina em um suporte de amostra de moagem e triture manualmente a amostra a 230 a 250 RPM com a água usando papel de carboneto de silício. Para coloração, mergulhe a superfície do solo em uma mancha azul por três a cinco minutos ou até que a mancha se desenvolva.

Depois de enxaguar a amostra com água da torneira, faça uma imagem da superfície do solo da amostra com uma dissecção de maior potência. Âmbito. Para visualizar as camadas celulares da retina, aplique uma gota de água destilada na superfície superior do epóxi logo acima da amostra. Para suavizar a difração na interface epóxi do ar.

Use uma fonte de luz gooseneck de fibra óptica para iluminar a amostra. Repita as etapas de moagem e imagem cada vez que moer uma espessura predefinida da amostra. O incremento mínimo de moagem preciso e reprodutível do suporte da amostra é de 20 mícrons.

Este processo é repetido incrementalmente até que uma seção transversal através do implante e do tecido ocular circundante seja exposta no nível desejado. Mostrado. Aqui estão exemplos de imagens de tecido retiniano visualizado imediatamente adjacente a um T retiniano de titânio em vários pontos durante o processo de trituração. As imagens mostram seções longitudinais da aderência penetrando no olho e saindo da esclera adjacente à retina manchada e não corada com silicone e azul de toluidina.

O descolamento e dobramento não artefactual da retina podem ser vistos em ambos os lados do silicone em baixa e alta potência. A haste da aderência é visível embutida em silicone e a cabeça da aderência penetrou na retina e na esclera. Aqui é evidente que há descolamento de retina não artificial na retina não corada em ambos os lados do silicone visualizado em baixa e alta potência.

O exemplo mostrou que há desorganização da retina adjacente à aderência e compressão da retina em um lado devido a um ângulo de inserção oblíquo. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de incorporar, orientar e recolher a amostra com cuidado, de modo que as superfícies do solo resultantes se alinhem no plano desejado. Além disso, várias fotografias devem ser coletadas em cada estágio de moagem, pois as amostras moídas não podem ser recuperadas hoje.

Este método pode fornecer informações sobre a histologia da prótese de retina. Também pode ser aplicado para visualizar a interface do tecido do dispositivo em outros sistemas que utilizam componentes implantados duros, como implantes cerebrais profundos, stents vasculares ou próteses ortopédicas.