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DOI: 10.3791/55004-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study focuses on quantifying transcript accumulation in specific cellular domains in maize. It highlights the importance of understanding gene expression differences at the leaf blade-sheath boundary and in lg1-R mutants compared to wild-type.
Muitos genes importantes para o desenvolvimento têm padrões de expressão específicos de células ou tecidos. Este artigo descreve experimentos de LM RNA-seq para identificar genes que são diferencialmente expressos no limite lâmina da folha do milho e em mutantes lg1-R em comparação com o tipo selvagem. As considerações experimentais discutidas aqui se aplicam a análises transcriptômicas de outros fenômenos de desenvolvimento.
O objetivo geral deste método é quantificar o acúmulo de transcritos em células ou domínios celulares específicos para que as comparações possam ser feitas entre diferentes domínios ou entre domínios equivalentes em amostras do tipo mutante e selvagem. Este método pode ajudar a responder a questões-chave na biologia do desenvolvimento, como como os domínios dos órgãos são especificados ou como mutações específicas afetam a expressão gênica. A principal vantagem dessa técnica é que o acúmulo de transcritos pode ser quantificado em domínios minúsculos e precisamente definidos que são muito pequenos para serem dissecados manualmente.
Antes de iniciar este procedimento, cultive planos de mudas de milho em condições padrão até duas semanas de idade. Para dissecar ápices de brotos para seções laterais, primeiro excise uma muda logo abaixo da linha do solo. Em seguida, use uma lâmina de barbear para remover fatias finas da base do caule até que um oval de calma circundado por uma ou duas folhas maduras seja visível.
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