Isolamento de Proteínas de Filamento Intermediário a partir de Tecidos Múltiplos de Rato para Estudar Modificações Pós-Translacionais associadas ao Envelhecimento

O objetivo geral deste procedimento bioquímico é isolar frações enriquecidas com filamentos intermediários de vários tecidos de camundongos, a fim de estudar modificações pós-traducionais das diferentes proteínas de filamentos intermediários específicos do tecido. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo do filamento intermediário, como a função e a regulação dessas importantes proteínas do citoesqueleto protetoras do estresse são afetadas durante o envelhecimento dos mamíferos. A principal vantagem dessa técnica é que a incorporação de uma etapa automatizada de lise de tecido permite que os usuários processem várias amostras de tecido de maneira rápida e eficiente.

Para começar, adicione um mililitro de tampão Triton X-100 gelado suplementado com inibidores de protease em um homogeneizador de tubo de vidro e coloque-o no gelo. Remova um pequeno pedaço de tecido do armazenamento de nitrogênio líquido e coloque-o diretamente no homogeneizador de vidro. Em seguida, mantendo o homogeneizador e a amostra no gelo o tempo todo, use aproximadamente 50 golpes de uma pastilha de politetrafluoretileno para homogeneizar a amostra, minimizando a formação de bolhas.