Determinando a expressão da superfície celular e a taxa endocítica de proteínas em culturas primárias de astrocitos usando a biotinilação

Neste vídeo, dois métodos serão apresentados, biotinilação da superfície celular e biotinilação de perseguição de pulso. Na demonstração a seguir, usaremos astrócitos. Esses são os tipos de células gliais mais abundantes no cérebro e expressam nossa proteína de interesse, que é a Aquaporina-4.

Os métodos que usamos neste artigo podem ser aplicados a muitos tipos diferentes de células, e podem incluir células em suspensão ou células aderentes. Essas técnicas podem ser usadas para estudar a expressão da superfície celular e a internalização de praticamente qualquer proteína transmembrana, desde que possua um domínio extracelular acessível à biotina. O objetivo geral deste ensaio de biotinilação de superfície celular é determinar os efeitos da laminina na expressão do canal permeável à água Aquaporina-4 na membrana plasmática dos astrócitos.