Deteção da endotoxina em Nano-formulações usando Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) ensaios

Este método pode ajudar a responder no campo médico sobre a segurança de nano medicamentos. As vantagens dessa técnica é que ela é padrão, e é usada mundialmente para avaliação de produtos, para nano medicamentos. Demonstração do procedimento, será Barry Neun, no Laboratório de Caracterização de Nano Tecnologia.

Para a preparação padrão de calibração, utilize 900 microliters de limulus amebocyte lysate, ou água de grau LAL. E 100 microlitres de endotoxina padrão de controle, para preparar quantas diluições intermediárias necessários, para permitir a elaboração de um padrão de calibração com uma concentração de uma unidade de endotoxina por mililitro. Em seguida, usando 900 microliters de água de grau LAL, e 100 microliters de uma unidade de endotoxina por padrão de calibração mililitro, preparar um segundo padrão de calibração, a uma concentração de 0,1 unidade de endotoxina por mililitro.

Em seguida, repita a diluição de dez vezes para preparar dois padrões de calibração mais baixos. Para obter um total de quatro padrões de calibração, variando de 0001 a uma unidade de endotoxina por mililitro. Para preparar uma unidade de endotoxina de 05 por controle de qualidade mililitro, combina 50 microlitrais de uma unidade de endotoxina por mililitro de solução de endotoxina padrão de controle, com 950 microliters de água de grau LAL.

Em seguida no software selecione as configurações do instrumento e crie o modelo. Selecione coletar dados e digite o ID de teste e o grupo de dados na guia geral. Na guia de hardware, selecione o tipo de instrumento e o método LAL e verifique se um número de série, o ID do sistema e as informações da porta serial aparecem na tela.

Clique bem duas vezes para confirmar a seleção do instrumento e a comunicação com o instrumento, e digite os ID da amostra na mesma ordem em que as amostras serão testadas. Em seguida, use os botões padrão para entrar na curva padrão de controle negativo e testar amostras. Adicione o volume apropriado de padrões de calibração de controle negativos e o controle de qualidade em tubos de vidro pré-rotulados duplicados.

E adicione o volume apropriado de LAL ao primeiro teste vil. Vórtice o vil brevemente, e coloque o frasco nas ranhuras de testes apropriadas no carrossel de instrumentos. Antes de carregar as amostras, realize várias diluições do nanomaterial de teste dentro da diluição máxima válida, conforme demonstrado.

Para preparar uma unidade de endotoxina 05 por mililitro de controle de melhoria da inibição, combine 25 microliters da unidade de endotoxina por mililitro de solução de endotoxina padrão de controle, com 475 microliters do nano material de teste em uma dada diluição. Após o vórtice, carregue os controles de aprimoramento de inovação adequados e as amostras de estudo não espetadas no instrumento. Em seguida, a alíquota não picou e os nano materiais cravados em uma diluição específica em tubos pré-rotulados.

Antes do vórtice, e carregando no carrossel de instrumentos. Para realizar um LAL Gel-Clot, prepare a endotoxina padrão de controle para uma concentração final de quatro lambda, e combine 100 microliters de padrão, com 100 microliters de água, ou teste amostra para alcançar uma concentração final de endotoxina padrão de controle dois lambda. Adicione 100 microliters de Lysine a cada diluição de lambda.

Vórtice os tubos brevemente, e coloque o rack de tubos em um banho de água de 37 graus Celsius por uma hora. No final da incubação, inverta os tubos com um movimento suave, e registe a manualmente os resultados usando mais para um coágulo firme, e menos para nenhum coágulo, ou um coágulo solto. Nesta análise representativa, a doxorubicina liposômica pegylated interferiu com LAL cromogênico na diluição cinco, porém essa interferência foi superada em diluições mais altas.

A recuperação do pico foi entre 50 e 200% quando a formulação foi testada em diluições 50 e 500 na turbidez e LAL cromogênica, bem como na diluição cinco, na turbidez LAL. Quando ajustados pelo fator de diluição, os resultados foram consistentes entre delírios em ambos os ensaios. Além disso, os resultados foram consistentes entre os três formatos de redação.

Lembre-se que cada amostra tem sua própria gama de diluições, cada formato LAL usa seu padrão de controle na doxina e lise, e que os tubos usados para preparar as diluições, e para realizar uma reação diferente para cada ensaio LAL. Para este procedimento, outros métodos como o Pode ser realizado para responder a perguntas adicionais sobre o material Após seu desenvolvimento, esta técnica abriu caminho para as suturas e o campo da nano medicina, explorar as aplicações médicas de nanotecnologia formuladas em humanos, e modelos clínicos, incluindo, mas não se limitando a primatas não humanos, coelhos, cães e ratos. Não se esqueça que trabalhar com doxina pode ser extremamente perigoso e as precauções, como usar equipamentos de proteção individual, devem ser sempre tomadas durante a realização deste procedimento.