Imagem latente confocal de RNA Double-Stranded e receptores de reconhecimento padrão na infecção pelo vírus de RNA de sentido negativo

O ensaio tradicional de detecção de RNA de dois fios geralmente não é sensível o suficiente para detectar RNA de dois fios formado em infecção por vírus RNA de sentido negativo. Portanto, a interação entre RNA de duplar e receptores de reconhecimento de padrão hospedeiro tem permanecido em grande parte evasiva para esses vírus. Utilizando este protocolo, somos capazes de visualizar e caracterizar a interação entre proteína nuclear viral, RNA de dupla vertente e hospedar um PRRs a um nível de célula única para vírus RNA de sentido negativo. Este é um ensaio multiplex que permite a coloração simultânea de RNA de dupla cadeia e dois alvos de proteína viral ou hospedeiro em células individuais. Ao contrário do ensaio RNA-FISH, esta técnica é independente da sequência de RNA e geralmente compatível com a detecção de anticorpos de alvos proteicos. Comece 24 horas antes da infecção semeando 200.000 células epiteliais pulmonares humanas A549 em tampas de vidro revestidas de Poli-D-Lysine em placas de 12 poços e cultivando-as aos 37