Name: Uma plataforma robusta de descoberta para a identificação de novos mediadores de metástase de melanoma (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-03-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 41 s
Description: Aprenda a avaliar mediadores da metástase de melanoma usando modelos in vivo padronizados. Este fluxo de trabalho sistemático melhora a reprodutibilidade dos dados e facilita a descoberta de alvos terapêuticos em oncologia.

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Agradecemos à Divisão de Tecnologias avançadas de Pesquisa (DART) da NYU Langone Health, e, em particular, ao Laboratório de Pesquisa em Patologia Experimental, ao Centro de Tecnologia do Genoma, ao Laboratório de Citometria e Triagem Celular, ao Núcleo de Imagem Pré-Clínica, que são parcialmente apoiados pelo Perlmutter Cancer Center Support Grant NIH/NCI 5P30CA016087. Agradecemos ao Grupo Cooperativo Interdisciplinar de Melanoma da NYU (PI: Dr. Iman Osman) por fornecer acesso a culturas de curto prazo de melanoma derivados do paciente+ (10-230BM e 12-273BM), que foram obtidos por meio de protocolos aprovados pelo IRB (Estudo de Consentimento Universal #s16-00122 e estudo do Grupo Cooperativo Interdisciplinar de Melanoma #10362). Agradecemos ao Dr. Robert Kerbel (Universidade de Toronto) por fornecer linhas de células de melanoma 113/6-4L e 131/4-5B1* e Dr. Meenhard Herlyn (Instituto Wistar) por fornecerem culturas WM 4265-2, WM 4257s-1, WM 4257-2 melanoma culturas de curto prazo**. E.H. é apoiado pelo NIH/NCI R01CA243446, P01CA206980, um American Cancer Society-Melanoma Research Alliance Team Science Award, e um NIH Melanoma SPORE (NCI P50 CA225450; PI: I.O.). A Figura 1 foi criada com Biorender.com.

<ol><li>Sung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+Cancer+Statistics+2020%3A+GLOBOCAN+Estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries%5BTitle%5D)+AND+%22CA%3A+A+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN Estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).</li>
<li>Adler, N. R., Haydon, A., McLean, C. A., Kelly, J. W., Mar, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+pathways+in+patients+with+cutaneous+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Research%22%5BJournal%5D)">Metastatic pathways in patients with cutaneous melanoma.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 30 (1), 13-27 (2017).</li>
<li>Platz, A., Egyhazi, S., Ringborg, U., Hansson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+cutaneous+melanoma%3B+a+review+of+NRAS+and+BRAF+mutation+frequencies+in+relation+to+histogenetic+subclass+and+body+site%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Oncology%22%5BJournal%5D)">Human cutaneous melanoma; a review of NRAS and BRAF mutation frequencies in relation to histogenetic subclass and body site.</a> Molecular Oncology. 1 (4), 395-405 (2008).</li>
<li>Alonso, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+study+in+melanoma+identifies+epithelial-mesenchymal+transition+as+a+major+determinant+of+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">A high-throughput study in melanoma identifies epithelial-mesenchymal transition as a major determinant of metastasis.</a> Cancer Research. 67 (7), 3450-3460 (2007).</li>
<li>Rowe, C. J., Khosrotehrani, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+and+biological+determinants+of+melanoma+progression%3A+Should+all+be+considered+for+clinical+management%5BTitle%5D)+AND+%22Australasian+Journal+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Clinical and biological determinants of melanoma progression: Should all be considered for clinical management.</a> Australasian Journal of Dermatology. 57 (3), 175-181 (2016).</li>
<li>Plebanek, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-metastatic+cancer+exosomes+induce+immune+surveillance+by+patrolling+monocytes+at+the+metastatic+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Pre-metastatic cancer exosomes induce immune surveillance by patrolling monocytes at the metastatic niche.</a> Nature Communications. 8 (1), 1319(2017).</li>
<li>Orgaz, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+pigment+epithelium-derived+factor+enables+migration%2C+invasion+and+metastatic+spread+of+human+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Loss of pigment epithelium-derived factor enables migration, invasion and metastatic spread of human melanoma.</a> Oncogene. 28 (47), 4147-4161 (2009).</li>
<li>Ladhani, O., Sanchez-Martinez, C., Orgaz, J. L., Jimenez, B., Volpert, O. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pigment+epithelium-derived+factor+blocks+tumor+extravasation+by+suppressing+amoeboid+morphology+and+mesenchymal+proteolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Pigment epithelium-derived factor blocks tumor extravasation by suppressing amoeboid morphology and mesenchymal proteolysis.</a> Neoplasia. 13 (7), 633-642 (2011).</li>
<li>Ju, R. J., Stehbens, S. J., Haass, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+melanoma+cell-stroma+interaction+in+cell+motility%2C+invasion%2C+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Medicine+-+Dermatology%22%5BJournal%5D)">The role of melanoma cell-stroma interaction in cell motility, invasion, and metastasis.</a> Frontiers in Medicine - Dermatology. 5, 307(2018).</li>
<li>Wiley, H. E., Gonzalez, E. B., Maki, W., Wu, M. T., Hwang, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+CC+chemokine+receptor-7+and+regional+lymph+node+metastasis+of+B16+murine+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">Expression of CC chemokine receptor-7 and regional lymph node metastasis of B16 murine melanoma.</a> Journal of the National Cancer Institute. 93 (21), 1638-1643 (2001).</li>
<li>Meier, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+pathways+and+time+courses+in+the+orderly+progression+of+cutaneous+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Metastatic pathways and time courses in the orderly progression of cutaneous melanoma.</a> British Journal of Dermatology. 147 (1), 62-70 (2002).</li>
<li>Turner, N., Ware, O., Bosenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+metastasis%3A+melanoma+and+other+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Genetics of metastasis: melanoma and other cancers.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 35 (5-6), 379-391 (2018).</li>
<li>Ubellacker, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+protects+metastasizing+melanoma+cells+from+ferroptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Lymph protects metastasizing melanoma cells from ferroptosis.</a> Nature. 585 (7823), 113-118 (2020).</li>
<li>Cukierman, E., Pankov, R., Stevens, D. R., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taking+cell-matrix+adhesions+to+the+third+dimension%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Taking cell-matrix adhesions to the third dimension.</a> Science. 294 (5547), 1708-1712 (2001).</li>
<li>Cunningham, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actin-binding+protein+requirement+for+cortical+stability+and+efficient+locomotion%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Actin-binding protein requirement for cortical stability and efficient locomotion.</a> Science. 255 (5042), 325-327 (1992).</li>
<li>Unger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+human+carcinomas%3A+physiologically+relevant+3D+models+to+improve+anti-cancer+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Modeling human carcinomas: physiologically relevant 3D models to improve anti-cancer drug development.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 79-80, 50-67 (2014).</li>
<li>Fong, E. L., Harrington, D. A., Farach-Carson, M. C., Yu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heralding+a+new+paradigm+in+3D+tumor+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Heralding a new paradigm in 3D tumor modeling.</a> Biomaterials. 108, 197-213 (2016).</li>
<li>Nakamura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+mouse+melanoma+cell+lines+by+their+mortal+malignancy+using+an+experimental+metastatic+model%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Science%22%5BJournal%5D)">Characterization of mouse melanoma cell lines by their mortal malignancy using an experimental metastatic model.</a> Life Science. 70 (7), 791-798 (2002).</li>
<li>Meeth, K., Wang, J. X., Micevic, G., Damsky, W., Bosenberg, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+YUMM+lines%3A+a+series+of+congenic+mouse+melanoma+cell+lines+with+defined+genetic+alterations%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Research%22%5BJournal%5D)">The YUMM lines: a series of congenic mouse melanoma cell lines with defined genetic alterations.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 29 (5), 590-597 (2016).</li>
<li>Koya, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BRAF+inhibitor+vemurafenib+improves+the+antitumor+activity+of+adoptive+cell+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">BRAF inhibitor vemurafenib improves the antitumor activity of adoptive cell immunotherapy.</a> Cancer Research. 72 (16), 3928-3937 (2012).</li>
<li>Jenkins, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+murine+BRaf%28V600E%29+melanoma+cell+lines+with+sensitivity+to+PLX4032%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Research%22%5BJournal%5D)">Multiple murine BRaf(V600E) melanoma cell lines with sensitivity to PLX4032.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 27 (3), 495-501 (2014).</li>
<li>Tuncer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SMAD+signaling+promotes+melanoma+metastasis+independently+of+phenotype+switching%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">SMAD signaling promotes melanoma metastasis independently of phenotype switching.</a> The Journal of Clinical Investigation. 129 (7), 2702-2716 (2019).</li>
<li>Schwartz, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incipient+Melanoma+Brain+Metastases+Instigate+Astrogliosis+and+Neuroinflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Incipient Melanoma Brain Metastases Instigate Astrogliosis and Neuroinflammation.</a> Cancer Research. 76 (15), 4359-4371 (2016).</li>
<li>Perez-Guijarro, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodel+preclinical+platform+predicts+clinical+response+of+melanoma+to+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Multimodel preclinical platform predicts clinical response of melanoma to immunotherapy.</a> Nature Medicine. 26 (5), 781-791 (2020).</li>
<li>Krepler, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Comprehensive+Patient-Derived+Xenograft+Collection+Representing+the+Heterogeneity+of+Melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">A Comprehensive Patient-Derived Xenograft Collection Representing the Heterogeneity of Melanoma.</a> Cell Reports. 21 (7), 1953-1967 (2017).</li>
<li>Agrawal, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systems+biology+approach+identifies+FUT8+as+a+driver+of+melanoma+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A systems biology approach identifies FUT8 as a driver of melanoma metastasis.</a> Cell. 31 (6), 804-819 (2017).</li>
<li>Hanniford, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+silencing+of+CDR1as+drives+IGF2BP3-mediated+melanoma+invasion+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Epigenetic silencing of CDR1as drives IGF2BP3-mediated melanoma invasion and metastasis.</a> Cancer Cell. 37 (1), 55-70 (2020).</li>
<li>Kim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PRMT5+control+of+cGAS%2FSTING+and+NLRC5+pathways+defines+melanoma+response+to+antitumor+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">PRMT5 control of cGAS/STING and NLRC5 pathways defines melanoma response to antitumor immunity.</a> Science Translational Medicine. 12 (551), (2020).</li>
<li>de Miera, E. V., Friedman, E. B., Greenwald, H. S., Perle, M. A., Osman, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+five+new+melanoma+low+passage+cell+lines+representing+the+clinical+and+genetic+profile+of+their+tumors+of+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Research%22%5BJournal%5D)">Development of five new melanoma low passage cell lines representing the clinical and genetic profile of their tumors of origin.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 25 (3), 395-397 (2012).</li>
<li>Morsi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+characterization+of+a+clinically+relevant+mouse+model+of+melanoma+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Research%22%5BJournal%5D)">Development and characterization of a clinically relevant mouse model of melanoma brain metastasis.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 26 (5), 743-745 (2013).</li>
<li>Huynh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+in+vivo+microRNA+targeting+of+liver+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Efficient in vivo microRNA targeting of liver metastasis.</a> Oncogene. 30 (12), 1481-1488 (2011).</li>
<li>Zou, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+variables+that+affect+human+hepatocyte+AAV+transduction+in+liver+chimeric+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy+Methods+and+Clinical+Development%22%5BJournal%5D)">Experimental variables that affect human hepatocyte AAV transduction in liver chimeric mice.</a> Molecular Therapy Methods and Clinical Development. 18, 189-198 (2020).</li>
<li>Kleffman, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanoma-secreted+Amyloid+Beta+Suppresses+Neuroinflammation+and+Promotes+Brain+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Melanoma-secreted Amyloid Beta Suppresses Neuroinflammation and Promotes Brain Metastasis.</a> bioRxiv. , 854885(2019).</li>
<li>Curtis, A., Calabro, K., Galarneau, J. R., Bigio, I. J., Krucker, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+variations+of+skin+pigmentation+in+C57BL%2F6+mice+affect+optical+bioluminescence+quantitation%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Imaging+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Temporal variations of skin pigmentation in C57BL/6 mice affect optical bioluminescence quantitation.</a> Molecular Imaging and Biology. 13 (6), 1114-1123 (2011).</li>
<li>Sil, P., Wong, S. W., Martinez, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((More+than+skin+deep%3A+autophagy+is+vital+for+skin+barrier+function%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">More than skin deep: autophagy is vital for skin barrier function.</a> Frontiers in Immunology. 9, 1376(2018).</li>
<li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+CRISPR+screen+in+a+mouse+model+of+tumor+growth+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Genome-wide CRISPR screen in a mouse model of tumor growth and metastasis.</a> Cell. 160 (6), 1246-1260 (2015).</li>
<li>Hart, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+CRISPR+screens+reveal+fitness+genes+and+genotype-specific+cancer+liabilities%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">High-resolution CRISPR screens reveal fitness genes and genotype-specific cancer liabilities.</a> Cell. 163 (6), 1515-1526 (2015).</li>
<li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+essential+genes+in+the+human+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of essential genes in the human genome.</a> Science. 350 (6264), 1096-1101 (2015).</li>
<li>Edgar, R., Domrachev, M., Lash, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+Expression+Omnibus%3A+NCBI+gene+expression+and+hybridization+array+data+repository%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Research%22%5BJournal%5D)">Gene Expression Omnibus: NCBI gene expression and hybridization array data repository.</a> Nucleic Acids Research. 30 (1), 207-210 (2002).</li>
<li>Lappalainen, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+European+Genome-phenome+Archive+of+human+data+consented+for+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">The European Genome-phenome Archive of human data consented for biomedical research.</a> Nature Genetics. 47 (7), 692-695 (2015).</li>
<li>Cerami, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cBio+cancer+genomics+portal%3A+an+open+platform+for+exploring+multidimensional+cancer+genomics+data%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">The cBio cancer genomics portal: an open platform for exploring multidimensional cancer genomics data.</a> Cancer Discovery. 2 (5), 401-404 (2012).</li>
<li>Grossman, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+a+shared+vision+for+cancer+genomic+data%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Toward a shared vision for cancer genomic data.</a> New England Journal of Medicine. 375 (12), 1109-1112 (2016).</li>
</ol>

Os autores não têm conflitos de interesse para declarar.

O objetivo deste relatório técnico é oferecer um fluxo de trabalho padronizado, de ponta a ponta para a investigação de potenciais atores em metástase de melanoma. Como os experimentos in vivo podem ser caros e demorados, estratégias para maximizar a eficiência e aumentar o valor das informações obtidas são primordiais.
É imprescindível a utilização de abordagens complementares ao longo de todo para cruzar os achados dentro do mesmo experimento. Por exemplo, tanto a coloração imunohis...

A alta mortalidade associada ao melanoma metastático combinada com uma incidência crescente de melanoma em todo o mundo1 (um aumento estimado de 7,86% até 2025) exige novas abordagens de tratamento. Os avanços na descoberta de alvos dependem de modelos reprodutíveis de metástase, um processo altamente complexo. Ao longo das etapas da cascata metastática, as células de melanoma devem superar inúmeras barreiras para alcançar a evasão do sistema imunológico e a colonização de tecidos distantes2. A resiliência e adaptabilidade das células de melanoma surgem de uma infinidade de fatores, incluindo sua alta carga mutacional genética3 e sua origem da crista neural, que confereplastia fenotípica crucial 3,4,5. A cada passo, os programas transcricionais permitem que as células de melanoma metástase mudem de um estado para outro com base em pistas do crosstalk com o microambiente, compreendendo o sistema imunológico6, o meio extracelular 7,8 e a arquitetura celular das barreiras físicas9 com as quais entram em contato. Por exemplo, as células de melanoma escapam da vigilância imunológica, regulando a expressão de importantes fatores imunes-priming secretados por tumor6.
Estudos descrevem um "nicho pré-metastático", no qual as células de melanoma secretam quimiocinas e citocinas para preparar o distante órgão "alvo" para a metástase10. Esses achados levantam questões importantes sobre o tropismo de órgãos das células de melanoma metastático e a rota anatômica que tomam para acessar tecidos distantes. Após a intravasação, as células de melanoma são conhecidas por metástase através de linfáticos (propagação linfática) e vasos sanguíneos (propagação hematógena)2,11. Enquanto a maioria dos pacientes apresenta doença localizada, um pequeno subconjunto de casos apresenta doença metastática distante e nenhuma disseminação linfática (envolvimento negativo do linfonodo)11, sugerindo a existência de vias metastáticas alternativas para o melanoma.
Quando colonizam um sítio metastático, as células de melanoma passam por adaptações epigenéticas e metabólicas12,13. Para acessar e invadir novos compartimentos, as células de melanoma empregam proteases14 e modificações citoesquelletal 11,15, que lhes permitem atravessar e crescer em sua nova localização. A dificuldade em direcionar as células de melanoma reside na complexidade e no número de adaptações; assim, o campo deve fazer esforços para recriar experimentalmente o maior número possível de etapas e adaptações. Apesar de inúmeros avanços em ensaios in vitro, como organoides e culturas 3D16,17, esses modelos apenas recapitulam indevidamente a cascata metastática in vivo.
Os modelos murinos têm mostrado valor ao encontrar um equilíbrio entre reprodutibilidade, viabilidade técnica e simulação de doença humana. Células de melanoma implantadas intravascularmente, ortototónicas e heterotototicamente de xenoenxertos derivados do paciente ou culturas de curto prazo em camundongos imuno-comprometidos ou humanizados representam a espinha dorsal da descoberta de alvos em melanoma metastático. No entanto, esses sistemas muitas vezes não têm uma restrição biológica crucial na metástase: o sistema imunológico. Modelos de metástase de melanoma síngênico que possuem essa restrição são relativamente escassos no campo. Esses sistemas, desenvolvidos em camundongos imunocompetuntes, incluindo B16-F1018, a família YUMM das linhas celulares19, SM120, D4M321, RIM322 ou mais recentemente, as linhascelulares RMS 23 e M1 (Mel114433), M3 (HCmel1274), M4 (B2905)24 linhas de células de melanoma, facilitam a investigação do papel complexo da resposta imune do hospedeiro na progressão do melanoma.
Aqui, é apresentado um pipeline para identificação de metas de metástase de melanoma. Com conjuntos de dados cada vez maiores de "omics" sendo gerados a partir de coortes de pacientes com melanoma, postulamos que os estudos que mais mantêm a promessa clínica são aqueles que decorrem da integração de big data, levando a um interrogatório funcional e mecanicista mecanicista mecático mecáticomecático. Ao usar modelos de camundongos para estudar potenciais alvos no processo metastático, pode-se explicar eventos in vivo e interações teciduais, aumentando assim a probabilidade de tradução clínica. Vários métodos para quantificar a carga metastática são descritos, fornecendo dados complementares sobre os resultados de qualquer experimento. Um protocolo para isolamento unicelular de tumores em vários órgãos é descrito para ajudar a caracterização imparcial da expressão genética em células metastáticas, que podem preceder o sequenciamento de RNA unicelular ou em massa.

<table><tbody><tr><td>#15 Lâmina de Fuga</td><td>WPI</td><td>500242</td><td>Para procedimentos cirúrgicos</td></tr><tr><td>#3 Scapel Handle</td><td>WPI</td><td>500236</td><td>Para procedimentos cirúrgicos</td></tr><tr><td>Seringa Tuberculin de 1 mL, ponta deslizante&nbsp;</td><td>Injeções BD</td><td>309626</td><td></td></tr><tr><td>Seringa de 10 mL, ponta deslizante&nbsp;</td><td>BD</td><td>301029</td><td>Perfusão</td></tr><tr><td>10% Formalina Tamponada com Sódio</td><td>EK Industries</td><td>4499-20L</td><td>Para fixador de perfusão/tecido</td></tr><tr><td>15 mL Cônico</td><td>Corning&nbsp;</td><td>430052</td><td>Cultura de células</td></tr><tr><td>15 mL Tubos de centrífuga cônicos de polipropileno</td><td>Falcon</td><td>352196</td><td>Cultura de células</td></tr><tr><td>200 Prova de etanol</td><td>Deacon Labs</td><td>04-355-223</td><td>Histologia</td></tr><tr><td>22G - agulha de 22mm</td><td>BD</td><td>305156</td><td>Perfusão</td></tr><tr><td>4-0 Sutura Vicryl</td><td>Ethicon</td><td>J464G</td><td>Sutura</td></tr><tr><td>4% tamponado com fosfato de Carson paraformaldeído&nbsp;</td><td>EMS</td><td>15733-10</td><td>Para perfusão/fixador de tecido</td></tr><tr><td>40&micro; m</td><td>Corning</td><td>431750</td><td>Processamento de tecidos</td></tr><tr><td>5-0 Sutura Absorvível&nbsp;</td><td>Fechamento Ethicon</td><td>6542000</td><td>50</td></tr><tr><td>mL Cônico&nbsp;</td><td>Corning&nbsp;</td><td>430828</td><td>Cultura de células</td></tr><tr><td>50mL Tubos de centrífuga cônicos de polipropileno</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td>Cultura de células</td></tr><tr><td>7-0 Sutura de seda&nbsp;</td><td>FST</td><td>18020-70</td><td>Ligadura</td></tr><tr><td>70&micro; m</td><td>Corning</td><td>431751</td><td>Processamento</td></tr><tr><td>de tecidos Mídia de montagem anti-desbotamento&nbsp; &nbsp;</td>Pinça de <td>Imunofluorescência</td> <td>Vector Labs</td><td>H-1000-10</td></tr><tr><td>aplicando Fórceps, 10cm&nbsp;</td><td>WPI</td><td>14189</td><td>Para procedimentos microcirúrgicos</td></tr><tr><td>Avance</td><td>Bruker</td><td>3 HD</td><td>NMR Console&nbsp;</td></tr><tr><td>Biospec 7030&nbsp;</td><td>Bruker</td><td>7030</td><td>Micro MRI</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Bioreg</td><td>A941</td><td>NuMA Coloração</td></tr><tr><td>Pinça de sutura Castroviejo, pontas retas Plataforma de amarração de 5,5mm, 11cm&nbsp;</td><td>WPI</td><td>WP5025501</td><td>Para procedimentos microcirúrgicos</td></tr><tr><td>Frasco de Coloração Coplin</td><td>Bel-Art&nbsp;</td><td>F44208-1000</td><td>Histologia</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542-1MG</td><td>Imunofluorescência</td></tr><tr><td>dCas9-KRAB</td><td>Addgene</td><td>110820</td><td>Manipulação genética</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>NEB</td><td>M0303L</td><td>Processamento de tecidos</td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Corning</td><td>21-030-CM</td><td>Processamento de tecidos</td></tr><tr><td>Lâmina de borda única não revestida extra afiada</td><td>GEM</td><td>62-0167</td><td>Processamento de tecidos</td></tr><tr><td>Substrato de Matriz Extracelular&nbsp;</td><td>A Corning</td><td>354234</td><td>considerar o fator de crescimento reduzido (como alternativa&nbsp;</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Cytiva</td><td>SH30910.03</td><td>Cultura de células</td></tr><tr><td>Fiji Image J</td><td>Fiji Image J</td><td>Software</td><td>Imunofluorescência</td></tr><tr><td>Cabra anti-coelho HRP multímero conjugado&nbsp;</td><td>Thermo Fisher</td><td>A16104</td><td>NuMA Coloração</td></tr><tr><td>Soro de Cabra</td><td>Gibco</td><td>PCN5000</td><td>Imunofluorescência</td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Corning</td><td>21-020-CV</td><td>Processamento</td></tr> de <tr><td>tecidos Hematoxilina&nbsp;</td><td>Richard-Allan Scientific&nbsp;</td><td>7231</td><td>Histologia</td></tr><tr><td>Illumina III&nbsp;</td><td>Seringa de insulina PerkinElmer</td><td>CLS136334</td><td>BLI Instrument</td></tr><tr><td>28G - agulha de 8mm</td><td>BD</td><td>329424</td><td>Injeções seringa de</td></tr><tr><td>insulina 31G - agulha de 6mm&nbsp;</td><td>BD</td><td>326730</td><td>Injeções</td></tr><tr><td>Pinça de íris, 10,2 cm, curva completa, serrilhada</td><td>WPI</td><td>504478</td><td>Para perfusão e procedimentos cirúrgicos</td></tr><tr><td>Isoflurano USP</td><td>Covetrus</td><td>11695067772</td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>Joalheiros # 7 Fórceps Titânio 11 cm 0,07 x 0,01 mm Ponta</td><td>WPI</td><td>WP6570</td><td>Para procedimentos microcirúrgicos</td></tr><tr><td>Cetamina HCl 100mg / mL</td><td>Mylan Ind.</td><td>1049007</td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>lentiCRISPRv2</td><td>Addgene</td><td>98290</td><td>Manipulação genética</td></tr><tr><td>Lycopersicon Esculentum (Tomate) Lectina, DyLight 649</td><td>Invitrogen</td><td>L32472</td><td>Marcador de células endoteliais vasculares</td></tr><tr><td>MEM aminoácidos não essenciais X 100</td><td>Corning</td><td>25-025-CI</td><td>Cultura de células</td></tr><tr><td>Metzenbaum Tesoura</td><td>WPI</td><td>503269</td><td>Para cirúrgico procedimentos</td></tr><tr><td>Unidade de Microinjeção</td><td>KOPF</td><td>5000</td><td>Injeções intracardíacas</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher</td><td>S25877&nbsp;</td><td>Coloração NuMA</td></tr><tr><td>Agulha 30G x 25mm</td><td>BD</td><td>305128</td><td>Agulha de Injeção Intracardíaca</td></tr><tr><td>33G x 15mm</td><td>Hamilton</td><td>7747-01 Porta-agulha</td> de <td>Injeção Intracarotídea</td></tr><tr><td>, Castroviejo, 14cm, com trava, 1,2mm Mandíbulas Serrilhadas</td><td>WPI</td><td>14137-G</td><td>Para procedimentos microcirúrgicos</td></tr><tr><td>NOD. Camundongos Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ</td><td>O Laboratório Jackson 005557</td><td></td><td>camundongos MURINOS modelo</td></tr><tr><td>NU/J</td><td>O Laboratório Jackson</td><td>002019</td><td>Modelo Murino</td></tr><tr><td>Aparelho Mitótico Nuclear Proteína policlonal coelho anti-humano&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>97585</td><td>NuMA Coloração</td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina 10000U/mL</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>Cultura de células</td></tr><tr><td>Percoll</td><td>GE</td><td>0891-01</td><td>solução de separação de densidade&nbsp;</td></tr><tr><td>PI Classic Luvas Cirúrgicas</td><td>Cardinal Health</td><td>2D72PT75X</td><td>Cirurgia</td></tr><tr><td>pLKO Tet-On</td><td>Addgene</td><td>21915</td><td>Manipulação genética</td></tr><tr>Solução de<td>iodopovidona 10%</td><td>Medline</td><td>MDS093943</td><td>Cirurgia Gotas</td></tr> de <tr><td>proparacaína 0,5%</td> <td>Akorn Pharma</td><td>AX0501</td><td>Anestésico local oftálmico</td></tr><tr><td>Puralube Petrolatum Pomada Oftálmica</td><td>Dechra</td>Lâmina de Barbear <td>de Anestesia</td> <td>83592</td></tr><tr><td>Lâminas de Dupla Borda&nbsp;</td><td>EMS</td><td>72000</td><td>Barbear e Fatiar Cérebro Vibrotom&nbsp;</td></tr><tr><td>Clipe Reflex 9mm EZ</td><td>Braintree</td><td>EZC-&nbsp; KIT</td><td>Fechamento de ferida</td></tr><tr><td>RPMI 1640&nbsp;</td><td>Tesoura de</td><td>Cultura de Células</td>Corning <td>10-040-CM</td></tr><tr><td>, Mola 10.5cm Str, Lâminas de 8mm</td><td>WPI</td><td>501235</td><td>Para procedimentos microcirúrgicos</td></tr><tr><td>Micrótomo de Lâmina Vibratória Semi-Automática</td><td>Leica</td><td>VT1200</td> Sistema de Vaporizador de Anestesia de Canal Único de <td>Imunofluorescência de Fatia de Cérebro</td></tr><tr><td></td><td>Kent Scientific</td><td>VetFlo-1210S&nbsp;</td><td>anestesia</td></tr><tr><td>Sistema de Câmara de Mesa Smartbox e Soprador de Exaustão</td><td>EZ Systems</td><td>TT4000</td><td>CO2 Eutanásia</td></tr><tr><td>Estéril Fenestrados Campo Descartável</td><td>Medline</td><td>NON21002</td><td>Cirurgia</td></tr><tr><td>Estéril Não Reforçado Aurora Batas Cirúrgicas com Mangas de Fixação</td><td>Medline</td><td>DYNJP2715</td><td></td></tr><tr><td>Cirurgia T25 Flask</td><td>Corning&nbsp;</td><td>430639</td><td>Cultura de células</td></tr><tr><td>Tris</td><td>Corning</td><td>46-031-CM</td><td>NuMA Coloração</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100-500ML</td><td>Imunofluorescência</td></tr><tr><td>Pinça de atar Troutman, 10cm, Padrão G curvo, ponta de 0,52mm com plataforma de atar</td><td>WPI</td><td>WP505210</td><td>Para procedimentos microcirúrgicos</td></tr><tr><td>Clipes de vaso 10G Pressão 5x 0,8mm Mandíbulas, 5/pkg</td><td>WPI</td><td>15911</td><td>Para procedimentos microcirúrgicos</td></tr><tr><td>Visiopharm</td><td>Visiopharm Visiopharm</td><td></td><td>NuMA Software de quantificação de coloração</td></tr><tr><td>Xylasine 100mg / mL</td><td>Akorn Pharma</td><td>59399-111-50</td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Fisher</td><td>X3P-1GAL</td><td>Histologia</td></tr></tbody></table>

uma plataforma robusta de descoberta para a identificação de novos mediadores de metástase de melanoma

A Robust Discovery Platform for the Identification of Novel Mediators of Melanoma Metastasis

A metástase é um processo complexo, exigindo que as células superem barreiras que são apenas modeladas incompletamente por ensaios in vitro . Um fluxo de trabalho sistemático foi estabelecido utilizando modelos in vivo robustos e reprodutíveis e métodos padronizados para identificar novos atores na metástase do melanoma. Essa abordagem permite a inferência de dados em estágios experimentais específicos para caracterizar precisamente o papel de um gene na metástase. Os modelos são estabelecidos pela introdução de células de melanoma geneticamente modificadas através de injeções intracardicascas, intradérmicas ou subcutâneas em camundongos, seguidos pelo monitoramento com imagens in vivo em série. Uma vez alcançados pontos finais pré-estabelecidos, tumores primários e/ou órgãos portadores de metástases são colhidos e processados para várias análises. As células tumorais podem ser classificadas e submetidas a qualquer uma das várias plataformas de "omics", incluindo o sequenciamento de RNA unicelular. Os órgãos passam por análises de imagem e imunohistopatológicas para quantificar a carga global de metástases e mapear sua localização anatômica específica. Este pipeline otimizado, incluindo protocolos padronizados para engrafamento, monitoramento, colheita de tecidos, processamento e análise, pode ser adotado para culturas derivadas do paciente, culturas de curto prazo e linhas celulares humanas e murinas estabelecidas de vários tipos de câncer sólido.

Os números a seguir ilustram como o fluxo de trabalho descrito tem sido aplicado para a identificação de novos condutores de metástase de melanoma. A Figura 2 resume os resultados de um estudo publicado em que foram estudados26 os efeitos do silenciamento do fucosyltransferase FUT8 in vivo melanoma. Resumidamente, a análise dos dados glicomicomicos do paciente humano (obtidos por matrizes de lectina) e o perfil transcriômico revelaram níveis aumentados de alf...

Este artigo descreve um fluxo de trabalho de técnicas empregadas para testar novos mediadores candidatos de metástase de melanoma e seus mecanismos de ação.

Uma plataforma robusta de descoberta para a identificação de novos mediadores de metástase de melanoma

Metastasis is a complex process, requiring cells to overcome barriers that are only incompletely modeled by in vitro assays. A systematic workflow was ...

Este protocolo descreve uma série de técnicas dentro de um fluxo de trabalho contínuo que pode ser usado para avaliar os efeitos in vivo dos reguladores candidatos da metástase de melanoma, mas também de metástases de outras malignidades sólidas. A principal vantagem do nosso fluxo de trabalho sistemático é o aumento da reprodutibilidade dos dados devido a modelos e técnicas in vivo robustas e padronizadas. Este pipeline oferece um caminho para o desenvolvimento de descoberta e terapia de alvos, testando candidatos inferidos a partir de dados da Omics ou ensaios in vitro em um ambiente in vivo.A curva de aprendizagem associada às técnicas apresentadas neste protocolo é encurtada utilizando os materiais fornecidos e seguindo a descrição detalhada na prática das etapas. Ajudando a demonstrar o procedimento estará Orlando Aristizabal, um cientista pesquisador do The Preclinical Imaging Core e Ran Moubarak, um instrutor do meu laboratório. Para injeções intradérmicas, anestesia e raspar um rato de oito a 10 semanas dentro de um armário de biossegurança, mantendo condições assépticas.Em seguida, segure e retraia a pele para trás contra a trajetória da facada da agulha e usando uma agulh

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Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Este artigo descreve os procedimentos de um ensaio de metástase experimental que é usado para determinar o potencial metastático de linhagens de células humanas de câncer.

Ensaio Metástase Experimental

Este vídeo descreve o protocolo para estabelecer um modelo de camundongo com metástase espontânea de xenoenxertos derivados de pacientes com câncer colorretal ou PDXs. Esses modelos de xenoenxerto imitam parcialmente as características dos carcinomas humanos e entendem os aspectos críticos das malignidades humanas, incluindo invasão e metástase.

Modelos de camundongos com metástase espontânea: uma plataforma para estudar o potencial metastático de células de câncer colorretal injetadas ortotopicamente

Neste vídeo, as células do melanoma são injetadas por via intravenosa através da veia da cauda no modelo de camundongo. As células do melanoma viajam ainda mais pelo sistema circulatório, adaptando-se ao microambiente distante e causando metástases em órgãos como os pulmões.

Modelo experimental de camundongo com melanoma metastático: uma plataforma para estudar o potencial metastático de células de melanoma nos pulmões

Este protocolo descreve uma técnica para preparação de amostras por co-cultura de explantes ovarianos com células cancerígenas da trompa de Falópio. Essas amostras são visualizadas usando espectroscopia de massa de imagem, ou IMS, para detectar a troca de pequenas moléculas entre as células e os tecidos, levando ao desenvolvimento do tumor.

Modelagem da comunicação do câncer de ovário para análise de espectrometria de massa por imagem: um método para identificar comunicadores químicos de pequenas moléculas no desenvolvimento de tumores ovarianos metastáticos

A metástase desempenha um papel profundo na virulência do câncer, sendo responsável por cerca de 90% das mortes.  Relatamos um protocolo para um modelo de melanoma metastático em camundongos que é útil para determinar a eficácia de agentes terapêuticos contra esse fenômeno clínico.

Injeção de células Singênico Murino melanoma para determinar o seu potencial metastático nos pulmões

Aqui, apresentamos um protocolo para gerar um modelo de pele de esferoide melanoma de organotypic 3D que recapitula os dois a arquitetura e complexidade multicelular de um órgão/tumor na vivo , mas ao mesmo tempo acomoda sistemática experimental intervenção.

Um modelo de pele Melanoma de Organotypic 3D esferoide

Apresentamos um protocolo para avaliar os níveis de expressão de microRNA (miRNAs) em circulação em amostras de plasma de pacientes com câncer. Em particular, usamos um kit comercialmente disponível para circulação miRNA extração e transcrição reversa. Finalmente, analisamos um painel de 24 miRNAs selecionados usando placas personalizadas em tempo real sonda pre-manchado.

Deteção de um painel personalizado de MicroRNA circulantes em pacientes com câncer colorretal metastático

Na era da imunoterapia e do perfil genômico de célula única, a biologia do câncer requer novas ferramentas in vitro e computacionais para investigar a interface tumor-imune em um contexto espaço-temporal adequado. Descrevemos protocolos para explorar co-culturas microfluídicas imunes a tumores em cenários 2D e 3D, compatíveis com monitoramento dinâmico e multiparamétrico de funções celulares.

Modelos de Co-Cultura Microfluídica para Dissecar a Resposta Imune em Microambientes Tumorais in vitro

Este é um método eficaz para testar supressores ou condutores de metástase de câncer. As células, transduzidas com uma biblioteca de expressão, são injetadas na vasculatura da membrana corioallantóica do frango para formar colônias metastáticas. Colônias que têm diminuído ou aumentado a invasividade são extirpadas, expandidas, reinjetadas para confirmar seu fenótipo e, finalmente, analisadas usando alto sequenciamento de rendimento.

Descoberta de reguladores metastáticos usando um modelo de membrana corioallantóica intravital rápida e quantitativa

O melanoma é uma doença muito agressiva que rapidamente se espalha para outros órgãos. Este protocolo descreve a aplicação de imagens de ultrassom de ultra-alta frequência, juntamente com renderização 3D, para monitorar o volume dos linfonodos inguinais no modelo de camundongo Braf/Pten de melanoma metastático.

Análise do volume do nódulo linfático por ultra-alta frequência ultrassom no modelo de camundongos geneticamente modificado braf/pten de melanoma

Aqui, apresentamos um protocolo para gerar organoides derivados de pacientes com melanoma por meio da cultura de suspensões de células dissociadas de tecidos frescos de melanoma. Esses organoides recapitulam fielmente tumores específicos do paciente in vitro, oferecendo uma abordagem inovadora para explorar mecanismos imunossupressores tumorais, triagem de drogas, mecanismos de resistência a drogas e abordagens de vigilância do câncer.

Revelando oportunidades terapêuticas com modelos organoides derivados de pacientes com melanoma

Aprenda a avaliar mediadores da metástase de melanoma usando modelos in vivo padronizados. Este fluxo de trabalho sistemático melhora a reprodutibilidade dos dados e facilita a descoberta de alvos terapêuticos em oncologia.

Uma plataforma robusta de descoberta para a identificação de novos mediadores de metástase de melanoma

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