Técnicas de Dissecção e Amostragem Histológica do Coração em Modelos de Grandes Animais para Doenças Cardiovasculares

As diferenças estruturais no coração entre espécies e indivíduos, bem como as discrepâncias na literatura, requerem uma compreensão completa da anatomia do coração e a adesão a uma metodologia rigorosa. Esta técnica pode melhorar a uniformidade do observador e aumentar a comparabilidade e a reprodutibilidade da pesquisa experimental de doenças cardiovasculares. Uma pessoa que não está familiarizada com esta técnica pode ter dificuldade em identificar todos os componentes do coração.

Minha recomendação é passar algum tempo se familiarizando com a anatomia do coração. Como a anatomia complexa do coração é difícil de compreender, é necessária uma apresentação visual do método. Para começar, pese o animal em questão antes de colocá-lo na mesa de necropsia do lado esquerdo.

Em seguida, realize um exame externo do sujeito, inspecionando e palpando a cútis e a mucosa, observando todas as alterações de cor, consistência e volume. Em seguida, usando uma faca, faça uma incisão afiada de sete centímetros na axila direita. Depois de localizar a junção coxofemoral, abra a cápsula com uma faca e corte o ligamento da cabeça do fêmur.

Estender a incisão da pele na axila craniana para a sínfise mandibular e caudalmente para o peroneum. Remova a pele com o bisturi, expondo a parede torácica e abdominal da linha média ventral ao nível dos processos transversais vertebrais. Em seguida, usando o bisturi e a pinça, crie um retalho através da parede abdominal, ventrocaudal ao arco costal direito.

Em seguida, seguindo a face caudal do hipocôndrio direito, abra a cavidade abdominal com uma tesoura. Continue estendendo a incisão caudalmente ao longo da área paralombar direita até a crista ilíaca externa. Depois, estenda a incisão até a inserção púbica da linha alba e examine brevemente os órgãos abdominais in situ para notar qualquer mudança em sua cor, consistência, volume e posição.

Em seguida, usando o bisturi e a pinça, puncione o diafragma no ponto mais alto. Em seguida, usando pinça de corte ósseo, remova a caixa torácica direita primeiro seccionando o segmento cartilaginoso paraesternal e, em seguida, o segmento dorsal das costelas proximal às articulações costovertebrais. Examine o coração in situ para observar seu tamanho, cor, posição e conexões com tecidos adjacentes.

Além disso, procure qualquer mudança na consistência por palpação. Em seguida, usando uma tesoura, abra a cavidade pericárdica com uma seção longitudinal da base até o ápice do coração. Examine a cavidade pericárdica e o epicárdio para qualquer mudança de cor, consistência e volume.

Em seguida, com a tesoura, libere o coração seccionando a veia cava superior pelo menos um centímetro acima da entrada no átrio direito, preservando a crista terminal e produzindo os cortes transversais da aorta, tronco pulmonar e ambas as veias cavas. Examine o contorno externo do órgão, a aparência do epicárdio, a do miocárdio pela transparência do epicárdio e a aparência externa dos grandes vasos. Para realizar o método de entrada-saída para dissecção cardíaca, coloque o coração com a face atrial para cima e, usando tesoura e pinça desdentada, cortados amplamente da veia cava caudal para o átrio direito.

Depois de cortar o coração no apêndice auricular direito para expor a crista terminal ou o nó sinoatrial, inspecione a válvula tricúspide a partir da vista dorsal. Em seguida, cortando uma seção do átrio direito até a junção entre o ventrículo direito e o septo intraventricular, exibir a valva atrioventricular direita. Em seguida, corte a parede livre do ventrículo direito ao longo do septo intraventricular até a origem do tronco pulmonar.

Depois de examinar minuciosamente as válvulas atrioventriculares direitas, incluindo as cordas tendíneas e os músculos papilares, corte as cordas tendíneas. Em seguida, coloque a pinça ao longo do tronco pulmonar e corte o tronco longitudinalmente para examinar a via de saída pulmonar, a origem do tronco pulmonar e as válvulas semilunares. Para inspecionar a valva bicúspide a partir da vista dorsal, corte o átrio esquerdo das veias pulmonares até a ponta da aurícula esquerda.

Em seguida, coloque o coração com o septo interventricular voltado para baixo e faça uma grande incisão na parede livre ventricular da base do ventrículo até o ápice cardíaco. Em seguida, corte as cordas tendíneas da cúspide da valva atrioventricular esquerda. Finalmente, abra a aorta colocando fórceps através da via de saída do ventrículo esquerdo.

Use soro fisiológico para remover todos os coágulos sanguíneos e pesar o coração. Para a coleta de amostras para histologia, primeiramente, faça dois cortes longitudinais paralelos, com aproximadamente cinco milímetros de distância, com bisturi envolvendo o átrio direito, a valva tricúspide e a parede livre do ventrículo direito. Em seguida, faça dois cortes paralelos semelhantes envolvendo o átrio esquerdo, a valva mitral, o músculo papilar dorsal e o ventrículo esquerdo.

Dentro do terço superior dorsal do coração, seção transversal da base do coração seguindo uma linha, incluindo o septo interventricular, átrio direito, aorta, válvula aórtica e valva tricúspide. E fazer dois cortes longitudinais paralelos envolvendo a base da aorta e o septo interventricular. Em seguida, corte o átrio direito ao redor da crista terminalis.

Para obter seis pedaços do nó sinoatrial, faça várias seções paralelas a cerca de três a quatro milímetros de distância, orientadas transversalmente no eixo longitudinal da crista. Em seguida, corte os tecidos obtidos em histológicas e mergulhe os tecidos em formalina tamponada 10% neutra por pelo menos 48 horas. Para coletar amostras das artérias coronárias, use fórceps e bisturi para dissecar as artérias coronárias do sulco paraconal e fixá-las em formalina tamponada 10% neutra durante a noite.

Se necessário, descalcifique o tecido em uma mistura individual de ácido 8% fórmico e ácido clorídrico. Em seguida, faça vários cortes transversais a cerca de três milímetros de distância. Coloque as seções em um histológico e coloque o em formalina tamponada 10% neutra para incorporação.

Depois de fixar o coração em formalina tamponada 10% neutra por pelo menos 48 horas, coloque duas pinças de dissecção retas desdentadas. Um através da cava craniana, átrio direito, valva tricúspide e ventrículo direito. E o outro através da veia pulmonar, átrio esquerdo, valva mitral e ventrículo esquerdo.

Utilizando o espaço entre o fórceps como orientação, use uma lâmina de corte para cortar da base até o ápice do coração. Cerca de cinco milímetros de distância, corte outra seção longitudinal do segmento cardíaco que inclui a aorta. Em seguida, separe completamente a base cardíaca do ápice.

Depois de colocar cada segmento de tecido em um histológico, coloque as em formalina tamponada 10% neutra até a incorporação. Este protocolo permitiu a visualização bem-sucedida das características externas e estruturas internas do coração. Usando esta técnica, amostras de tecido cardíaco podem ser coletadas com sucesso para estudos histológicos de diferentes animais, como cães e gatos.

Seja sempre cauteloso ao liberar o coração, porque pode danificar algumas estruturas de interesse. E também, durante a dissecação, colheita e incorporação do nó sinoatrial. Embora este método tenha sido criado para diagnosticar modelagem de arritmia, cardiomiopatia hipertrófica, infarto do miocárdio e intoxicação cardíaca, ele pode ser usado para diagnosticar qualquer condição cardíaca.