Um Método Visual Sensível para a Detecção de Bactérias Produtoras de Sulfeto de Hidrogênio

As bactérias produtoras de sulfeto de hidrogênio podem utilizar aminoácidos e proteínas contendo enxofre para produzir sulfeto de hidrogênio. Aqui, estabelecemos um método simples e sensível para detectar o sulfeto de hidrogênio em bactérias. Este método é uma versão modificada da precipitação de sulfeto de bismuto que usou placas de microtitulação transparentes de 96 poços.

A cultura bacteriana foi combinada com solução de bismuto contendo L-cisteína e cultivada por 20 minutos, ao final dos quais um precipitado negro foi observado. Quem demonstrará os procedimentos será Wei Zhu, assistente de pesquisa do nosso laboratório. Comece transferindo as colônias bacterianas de uma placa de ágar Luria-Bertani ou LB para 100 mililitros de meio LB e cultive a 37 graus Celsius por 12 a 16 horas até que a concentração bacteriana seja de cerca de 1 bilhão de células por mililitro.

Transfira uma colônia bacteriana de Fusobacterium nucleatum e Proteus vulgaris do caldo de soja Trypticase ou placas de ágar TSB para 100 mililitros de meio TSB e cultive a 37 graus Celsius anaerobicamente por 24 horas até que a concentração bacteriana seja de cerca de 1 bilhão de células por mililitro. Misture 100 microlitros de cultura bacteriana com 100 microlitros de solução de bismuto recém-preparada nas placas de microtitulação de 96 poços e cultura por 20 minutos a 37 graus Celsius. Para cada cepa bacteriana, realizar a análise em triplicata.

Após 20 minutos, verifique se há mudança de cor. Se a cor da solução mudar de amarelo claro para preto, isso indica que a bactéria é capaz de produzir sulfeto de hidrogênio ou H2S. Repita esta medida três vezes.

Determinar a sensibilidade do método utilizando diferentes concentrações de hidrossulfeto de sódio misturado com solução de sulfeto de bismuto. Finalmente, determinar a presença de íons bissulfeto e sulfeto observando a formação de um precipitado de sulfeto de bismuto preto. Classifique a cor dos poços usando uma escala visual de nenhuma produção de cor até a produção de cor preta mais escura.

O desempenho do teste de sulfeto de hidrogênio foi investigado usando culturas puras de cepas bacterianas selecionadas. Os resultados indicaram que Salmonella paratyphi B, Fusobacterium nucleatum, Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa e Proteus vulgaris podem produzir sulfeto de hidrogênio com precipitado de sulfeto de bismuto preto. Enquanto Salmonella paratyphi A, Staphylococcus aureus, Aeromonas hydrophila e Klebsiella pneumoniae não apresentaram precipitado preto.

A principal vantagem deste método é que é fácil de replicar e não requer equipamentos especializados.