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DOI: 10.3791/64268-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study describes a method for measuring absolute DNA densities within adherent cell nuclei, utilizing Voronoi tessellation of single-molecule localization microscopy (SMLM) data. This approach enables the investigation of spatial constraints in chromatin structures, linking genetic information with cell cycle stages.
O presente protocolo descreve um método que mede as densidades absolutas de DNA dentro de núcleos de células aderentes usando tesselação de Voronoi de dados de microscopia de localização de molécula única, volume conhecido, tamanho do genoma e estágio do ciclo celular.
O presente método permite medições absolutas de densidade de DNA em núcleos celulares para investigar as restrições espaciais em estruturas de cromatina que, de outra forma, são caracterizadas apenas por modificações de histonas pós-tradução. A tesselação de Voronoi combinada com SMLM permite estimativas de densidade absoluta de DNA em termos de par de bases por micrômetro quadrado. O único conhecimento a priori necessário é o conteúdo total de DNA do núcleo celular medido.
Em experimentos futuros, seria interessante investigar se as diferenças absolutas de densidade se correlacionam com informações biológicas de outros métodos, como imunofluorescência de modificações epigenéticas ou dados de Hi-C. Comece reconstruindo a área digitalizada juntando as imagens individuais pré-gravadas. Abra o CellProfiler e carregue o pipeline cellcycleanalysis.cpproj.
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