Visualizando focos de DNA de fita simples na fase G1 do ciclo celular

A resposta aos danos no DNA é indispensável para a vida. Como o DNA é constantemente exposto a vários motores prejudiciais, a falta de seu reparo leva à instabilidade do genoma e a doenças. Desenvolvemos um método baseado na propriedade biológica do RPA2, para visualizar o trato de DNA de fita simples durante o reparo do DNA em diferentes estágios do ciclo celular.

O método tradicional para detecção de DNA de fita simples utiliza anticorpos BrdU. Essa abordagem pode ser usada para replicar células ativamente. Além disso, esse anticorpo tende a reagir de forma cruzada com outros análogos de nucleotídeos, limitando seu uso.

Ao contrário do BRDU, nossa abordagem tem uma relação sinal/ruído mais alta, tornando-a utilizável em todas as fases do ciclo. A compreensão da ação de diferentes vias de reparo do DNA em várias fases do ciclo celular e células potencialmente não replicantes é crucial. Nosso protocolo fornece uma nova abordagem e ferramenta para visualizar focos de DNA de fita simples, onde as abordagens clássicas utilizando BrdU são limitadas.

Uma compreensão abrangente dos processos de reparo do DNA poderia servir como alvos terapêuticos para tratar câncer, envelhecimento e doenças neurológicas. A maioria das nossas células são terminalmente diferenciadas e, portanto, não se replicam e se dividem. É crucial obter uma melhor compreensão de como essas células reparam várias lesões de DNA.

Portanto, nosso laboratório estará focando principalmente em processos de reparo de DNA pós-replicativo e desenvolvendo novas ferramentas para estudá-los.