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DOI: 10.3791/4251-v
Jason M. Beckta1,2, Scott C. Henderson3, Kristoffer Valerie1,2,4
1Department of Radiation Oncology,Virginia Commonwealth University, 2Department of Biochemistry & Molecular Biology,Virginia Commonwealth University, 3Department of Anatomy & Neurobiology,Virginia Commonwealth University, 4Massey Cancer Center,Virginia Commonwealth University
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Este protocolo descreve um método para a visualização de um DNA double-strand proteína quebra de sinalização activada em resposta a danos no ADN, bem como sua localização durante a mitose.
Esta demonstração usa imagens de células vivas de duas e 3D para entender as relações espaço-temporais das proteínas envolvidas na resposta ao dano do DNA. Primeiro, transfecte ou transduza sua linha celular de escolha com construções de expressão contendo marcadores fluorescentes apropriados. Aqui, M Cherry e GFP adquirem uma série de vídeos de controle mostrando as células marcadas com fluorescência em condições normais.
Em seguida, aplique um tratamento apropriado e capture dados dos efeitos do tratamento no processo de células fluorescentes e analise os dados de vídeo para relações espaço-temporais de proteínas. Em última análise, a microscopia de fluorescência de células vivas pode detalhar a dinâmica celular, como a formação de focos de 53 BP um em resposta a agentes prejudiciais ao DNA ou o comportamento de 53 BP durante a mitose. Começamos a nos interessar por imagens de estilo de vida em dois e 3D quando queríamos estudar como os tratamentos variados afetavam a mitose em certas linhagens celulares.
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