Name: Imagens tridimensionais de tecido portador de tumor usando o clareamento iterativo estende a abordagem de multiplexidade (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-25T13:50:00.000+00:00
Duration: 7 min 16 s
Description: Aprenda a otimizar imunofluorescência multiplex para caracterizar a arquitetura tridimensional de metástases peritoneais. Este protocolo estende a análise além de seções bidimensionais, revelando a distribuição espacial de marcadores imunes e estruturais.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Alexa Fluor Plus 750 Faloidina</td><td>Invitrogen</td><td>A30105</td><td>Corante F-actina</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 anti-CD206 humano (MMR) Anticorpo</td><td>BioLegend</td><td>321114</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo Alexa Fluor 488 anti-CD31 humano Anticorpo</td><td>BioLegend</td><td>303110</td><td>Anticorpo</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Anticorpo anti-CD4 humano</td><td>BioLegend</td><td>300519</td><td>anticorpo</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 anticorpo anti-humano HLA-DR</td><td>BioLegend</td><td>307656</td><td>anticorpo</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 anti-camundongo/humano CD44 Anticorpo</td><td>BioLegend</td><td>103016</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 anti-humano CD45 Anticorpo</td><td>BioLegend</td><td>304060</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo Alexa Fluor 647 Anti-Calretinina [EP1798]</td><td>Abcam</td><td>ab214244</td><td></td></tr><tr><td>anticorpo Alexa Fluor 647 anti-humano CD3</td><td></td><td>Anticorpo 300416 BioLegend</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo anti-CD8 humano Alexa Fluor 647 Anticorpo</td><td></td><td>344726</td><td></td></tr><tr><td>BioLegend Anticorpo anti-podoplanina humana Alexa Fluor 647 Anticorpo</td><td>337007</td><td></td><td>BioLegend</td></tr><tr><td>Anticorpo anti-Vimentina Alexa Fluor 647</td><td></td><td>Anticorpo</td><td>677807</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 Anticorpo CD68 (KP1)</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-20060AF647</td><td>anticorpo</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 750 Citoqueratina, pan Anticorpo (AE-1 / AE-3)</td> <td>Novus</td><td>NBP2-33200AF750</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo Alexa Fluor 750 Humano alfa-Smooth Muscle Actina R</td><td>& D</td><td>IC1420S</td><td>anticorpo</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 CD20 Anticorpo monoclonal (L26) eBioscience</td><td>Thermo Fisher</td><td>53-0202-82</td><td>anticorpo</td></tr><tr><td>Antibiótico-Antimicótico</td><td>Gibco</td><td>15240096</td><td>suplemento meio de colheita</td></tr><tr><td>BioMed Resina Transparente (Forma 3)</td> <td>Resina FormLabs</td><td>RS-F2-BMCL-01</td><td>usada para plataforma + placa de incubação</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma</td><td>A7906-500g</td><td>Componente da solução de bloqueio</td></tr><tr><td>Material de acrílico fundido de 1/32" de espessura</td><td></td><td></td><td>usado para cortar o slider</td></tr><tr><td>CleanStation DT3&nbsp;</td><td>Pós-processamento Stratasys</td><td>DT3</td><td>para ajustador de altura e tampa externa</td></tr><tr><td>Recipiente, Espécime</td><td>McKesson</td><td>870203</td><td>transferência de tecido da mesa de peração para a mesa de preparação</td></tr><tr><td>CorelDraw&nbsp;</td><td>CorelDRAW</td><td></td><td>Software para preparar o arquivo de design baseado em vetor para corte a laser</td></tr><tr><td>Fixador</td><td>de 554655</td><td>Cytofix</td><td>BD Bioscience</td></tr><tr>Prato de <td>353025</td><td>Falcon</td><td>de 15 cm</td><td>usado durante a montagem</td></tr><tr><td>Prato de 35 mm Nº 1.5 Lamínula 14 mm Diâmetro do vidro Prato de imagem não revestido</td><td>Matek</td><td>P35G-1.5-14-C</td><td></td></tr><tr><td>DMEM (sem glicose)</td><td>Gibco</td><td>11966025</td><td>meio de colheita</td></tr><tr><td>Fc Block</td><td>BD Bioscience</td><td>564220</td><td>componente de solução de bloqueio</td></tr><tr><td>Form 3B +</td> <td>Formlabs</td><td>Form 3B +</td> <td>impressora usada para plataforma + placa de incubação</td></tr><tr><td>Form Cure</td><td>Formlabs</td><td>FH--01 pós-processamento</td><td>para plataforma + placa de incubação</td></tr><tr><td>Form Wash</td><td>Formlabs</td><td>FH-WA-01 pós-processamento</td><td>para plataforma + placa</td></tr> <tr>de incubação<td>GrabCAD Print</td><td>GrabCAD</td><td>GrabCAD</td><td>Software de impressão para preparar modelos para impressoras Stratasys</td></tr><tr><td>Hoechst 33342 10 mg/mL</td><td>Biotium</td><td>40046</td><td>corante nuclear</td></tr><tr><td>J826 Prime Impressora 3D</td><td>Impressora Stratasys</td><td>J826</td><td>usada para ajustador de altura e tampa externa</td></tr><tr><td>LAS X</td><td>Leica</td><td>LAS X</td><td>Software confocal</td></tr><tr><td>Sistema de corte a laser&nbsp;</td><td>Universal Laser Systems</td><td>ULS PLS6.150D</td><td>CO2 Corte a laser usado para slider</td></tr><tr><td>Borohidreto de lítio</td><td>STREM Chemicals</td><td>93-0397</td><td>branqueamento químico</td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4</td><td>Base de 10010023 Gibco</td><td></td><td>Tampão para lavar, bloquear, manchar</td></tr><tr><td>PreForm</td><td>FormLabs</td><td>Software PreForm para preparar modelos para impressoras Formlab</td><td></td></tr><tr><td>Suturas de seda&nbsp; 2-0&nbsp;</td><td>Ethicon</td><td>A305. O35</td><td>fixa tecido à plataforma</td></tr><tr><td>Stellaris 8 WLL microscópio confocal</td><td>Leica</td><td>STELLARIS 8</td><td>Imagem Confocal&nbsp;</td></tr><tr>Filtro <td></td><td></td><td>de seringa</td><td>solução ab Triton</td></tr><tr><td>X-100</td><td>American Bio</td><td>AB02025-00100</td><td>reagente permeabelizante, componente de solução de bloqueio</td></tr><tr><td>Vero ContactClear</td><td>Stratasys</td><td>CTT610, 4 KG</td><td>resina usada para ajustador de altura e tampa externa</td></tr><tr><td>Mola da bandeja de aquecimento</td><td>EUA</td><td>ST-1220</td><td>mantém a mídia e o tecido aquecidos</td></tr><tr><td>Água destilada</td><td>Diluente Gibco</td><td>15230-170</td><td>para LiBH4</td></tr></tbody></table>

imagens tridimensionais de tecido portador de tumor usando o clareamento iterativo estende a abordagem de multiplexidade

Three-Dimensional Imaging of Tumor-Bearing Tissue Using the Iterative Bleaching Extends Multiplexity Approach

O peritônio é uma estrutura membranosa com menos de 1 mm de espessura que reveste a superfície da parede abdominal e é contígua às superfícies dos órgãos abdominais. É composto de mesotélio superficial e tecido conjuntivo subjacente que é intercalado com células adiposas, linfócitos, macrófagos e fibroblastos, bem como vasos sanguíneos e linfáticos. As neoplasias peritoneais geralmente resultam de metástases tumorais abdominais (por exemplo, câncer de ovário ou câncer gástrico)18 ou, menos frequentemente, podem ser tumores primários do peritônio (por exemplo, mesotelioma)19. Essas lesões tumorais geralmente pequenas (&lt;1 cm) são altamente complexas, mas são passíveis de caracterização 3D usando a técnica descrita. Uma projeção máxima de cinco seções confocais é usada para visualizar toda a amostra montada em uma plataforma (Figura 4, inserida no canto superior esquerdo). Três anticorpos conjugados primários (AF488-CD44, AF594-CD45 e AF647-Podoplanina) juntamente com o corante nuclear Hoechst foram usados para a primeira rodada de IBEX (IBEX1, Figura 4). As lesões tumorais tornam-se evidentes pelas estruturas em forma de roseta que são duplamente positivas para CD44 e Podoplanina e mostram um arranjo de núcleos característico do mesotelioma papilar.
As células tumorais foram identificadas usando morfologia celular e dois anticorpos, uma vez que tanto a anti-podoplanina quanto o anti-CD44 reconhecem células não tumorais, como evidenciado pela detecção de vasos linfáticos via anti-podoplanina e a ligação do anticorpo CD44 a subconjuntos de células imunes. Regiões de interesse (ROIs) menores são então capturadas usando um formato de varredura de bloco em resolução mais alta em tamanhos de passo Z otimizados para renderizar projeções 3D (Figura 5A). As plataformas foram levadas através dos procedimentos de coloração iterativos e as mesmas ROIs foram visualizadas nos ciclos IBEX 1-6. Imagens representativas para interfaces tumorais (caixa amarela) e tumor-estrutura linfóide terciária (TLS) (caixa azul) são montadas na Figura 5B-M. 
A presença de TLS e a densidade de células CD3-positivas indicam infiltração significativa de células imunes20 e possivelmente capacidade de resposta a drogas imunomoduladoras21. É importante notar que o TLS e a maior parte das lesões tumorais estão presentes em diferentes profundidades Z do tecido, conforme demonstrado na comparação de projeções de pilha de diferentes seções ópticas na Figura 6, destacando os benefícios da imagem 3D e a potencial biologia perdida quando a imagem 2D é aplicada a estruturas 3D. O caráter 3D dessas lesões torna-se mais evidente nos arquivos de filme (Filme 1-12), que retratam representações de volume das lesões individuais na Figura 5.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig01.jpg"> 
Figura 1: Fluxo de trabalho da impressão 3D para a imagem 3D de tumores peritoneais. O protocolo consiste em uma sequência de cinco etapas para preparar imagens multiplexadas em 3D a partir de tecido peritoneal portador de tumor. (1) Impressão de plataformas receptoras de tecidos, peças adaptadoras de imagem e placa de incubação. (2) Procedimentos de colheita e montagem de tecidos. (3) Fixação com paraformaldeído. (4) Ciclos de coloração e imagem IBEX. (5) Reconstrução 3D usando software de imagem. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig02.jpg"> 
Figura 2: Componentes de hardware com interface de tecido para imagens 3D. (A) Diagrama esquemático da montagem da plataforma dentro do adaptador de imagem. (B) Uma placa de incubação de 9 poços. (C) Fotografias de componentes do adaptador de imagem com montagem. (D) Peritônio com mesotelioma observado durante a laparoscopia diagnóstica. (E) Montagem de tecido na plataforma. (F, G) Peritônio portador de tumor montado em plataformas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig03.jpg"> 
Figura 3: Esquema da linha do tempo dos ciclos IBEX. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig04.jpg"> 
Figura 4: Visão geral da plataforma após a incubação com o painel IBEX1. Projeção máxima de toda a plataforma após incubação com painel IBEX1 (Hoechst, AF488-CD44, AF594-CD45 e AF647-Podoplanina). O círculo tracejado destaca o tumor. Inserção: Fotografia do peritônio portador de tumor montado na plataforma de imagem. Barra de escala: 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig04large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig05.jpg"> 
Figura 5: Imagens de imunofluorescência de alta resolução de regiões selecionadas da plataforma. (A) Projeção máxima da imagem mesclada da pilha Z de 56 blocos adquirida após incubação com o painel IBEX1 (Hoechst, AF488-CD44, AF594-CD45 e AF647-Podoplanina). Retângulo amarelo: lesão tumoral mostrada em painéis (B-G). Retângulo azul: interface tumor-estrutura linfoide terciária mostrada em (H-M). (BG) Uma lesão tumoral individual com painel IBEX 1-6 em renderização de volume. (B) IBEX1, verde: CD44, vermelho: CD45, ciano: Podoplanina. (C) IBEX2, verde: CD20, vermelho: F-actina, ciano: CD3. (D) IBEX3, verde: CD8, vermelho: CD4, ciano: panCK. (E) IBEX4, verde: CD31, ciano: CD68. (F) IBEX5, verde: CD206, ciano: Calretinina. (G) IBEX6, verde: Vimentina, vermelho: HLADR. (H-M) Uma interface individual de estrutura linfóide tumor-terciária com o painel IBEX 1-6 em renderização de volume. (H) IBEX1, verde: CD44, vermelho: CD45, ciano: Podoplanina. (I) IBEX2, verde: CD20, vermelho: F-actina, ciano: CD3. (J) IBEX3, verde: CD4, vermelho: panCK, ciano: CD8. (K) IBEX4, verde: CD31, vermelho: SMA, ciano: CD68. (L) IBEX5, verde: CD206, ciano: Calretinina. (M) IBEX6, verde: HLADR, ciano: Vimentina. Todos os painéis, azul: Hoechst. Barras de escala: (A, 1 mm); (B-M, 250 μm). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig05large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig06.jpg"> 
Figura 6: Imagem 2D simulada. A comparação das projeções limitadas (10 seções ópticas) e full stack (102 seções ópticas) confirma a perda de contexto do tecido na simulação 2D. (A) Projeção máxima das seções 30-40 (10 μm). (B) Projeção máxima das seções 85-95 (10 μm). (C) Projeção máxima das seções 1-102 (~ 100 μm). Todos os painéis, IBEX2 (Hoechst, AF488-CD20, AF647-CD3, AF790-faloidina). Barra de escala: 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig06large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
Tabela 1: Anticorpos usados para os painéis IBEX individuais. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Table%201_IBEX%20panels.xlsx" target="_blank">Clique aqui para baixar esta tabela.</a>
Filme 1: Renderização de volume animado da lesão individual com o painel IBEX 1 (azul: Hoechst, verde: CD44, vermelho: CD45, ciano: Podoplanina). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie1_IBEX1.mp4" target="_blank">Por favor, clique aqui para baixar este filme.</a>
Filme 2: Renderização de volume animado da lesão individual com o painel IBEX 2 (azul: Hoechst, verde: CD20, vermelho: F-actina, ciano: CD3). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie2_IBEX2.mp4" target="_blank">Por favor, clique aqui para baixar este filme.</a>
Filme 3: Renderização de volume animado da lesão individual com o painel IBEX 3 (azul: Hoechst, verde: CD8, vermelho: CD4, ciano: panCK). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie3_IBEX3.mp4" target="_blank">Por favor, clique aqui para baixar este filme.</a>
Filme 4: Renderização de volume animado da lesão individual com o painel IBEX 4 (azul: Hoechst, verde: CD31, ciano: CD68). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie4_IBEX4.mp4" target="_blank">Por favor, clique aqui para baixar este filme.</a>
Filme 5: Renderização de volume animado da lesão individual com o painel IBEX 5 (azul: Hoechst, verde: CD206, ciano: Calretinina). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie5_IBEX5.mp4" target="_blank">Por favor, clique aqui para baixar este filme.</a>
Filme 6: Renderização de volume animado da lesão individual com o painel IBEX 6 (azul: Hoechst, verde: Vimentin, vermelho: HLADR). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie6_IBEX6.mp4" target="_blank">Por favor, clique aqui para baixar este filme.</a>
Filme 7: Renderização de volume animado da interface estrutura-lesão linfoide terciária com o painel IBEX 1 (azul: Hoechst, verde: CD44, vermelho: CD45, ciano: Podoplanina). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie7_TLS_IBEX1.mp4" target="_blank">Por favor, clique aqui para baixar este filme.</a>
Filme 8: Renderização de volume animado da interface estrutura-lesão linfóide terciária com o painel IBEX 2 (azul: Hoechst, verde: CD20, vermelho: F-actina, ciano: CD3). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie8_TLS_IBEX2.mp4" target="_blank">Por favor, clique aqui para baixar este filme.</a>
Filme 9: Renderização de volume animado da interface estrutura-lesão linfóide terciária com o painel IBEX 3 (azul: Hoechst, verde: CD8, vermelho: CD4, ciano: panCK). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie9_TLS_IBEX3.mp4" target="_blank">Por favor, clique aqui para baixar este filme.</a>
Filme 10: Renderização de volume animado da interface estrutura-lesão linfóide terciária com o painel IBEX 4 (azul: Hoechst, verde: CD31, vermelho: SMA, ciano: CD68). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie10_TLS_IBEX4.mp4" target="_blank">Por favor, clique aqui para baixar este filme.</a>
Filme 11: Renderização de volume animado da interface estrutura-lesão linfóide terciária com o painel IBEX 5 (azul: Hoechst, verde: CD206, ciano: Calretinina). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie11_TLS_IBEX5.mp4" target="_blank">Por favor, clique aqui para baixar este filme.</a>
Filme 12: Renderização de volume animado da interface estrutura-lesão linfoide terciária com o painel IBEX 6 (azul: Hoechst, verde: Vimentin, vermelho: HLADR). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie12_TLS_IBEX6.mp4" target="_blank">Por favor, clique aqui para baixar este filme.</a>
Arquivo suplementar 1: Arquivo de impressão para a placa de incubação. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/incubation_plate.form" target="_blank">Clique aqui para baixar este arquivo.</a>
Arquivo Suplementar 2: Arquivo de impressão para as 36 plataformas individuais. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/platform_x36.form" target="_blank">Clique aqui para baixar este arquivo.</a>
Arquivo suplementar 3: Imprima o arquivo para o anel de ajuste de altura. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/SMART_imaging_heightAdjuster.STL" target="_blank">Clique aqui para baixar este arquivo.</a>
Arquivo suplementar 4: Imprima o arquivo para a tampa externa. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/SMART_imaging_petriDishLid_35mm.STL" target="_blank">Clique aqui para baixar este arquivo.</a>
Arquivo suplementar 5: Arquivo de corte a laser para o controle deslizante. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/imaging_platform_slider.DWG" target="_blank">Clique aqui para baixar este arquivo.</a>

Imagens tridimensionais de tecido portador de tumor usando o clareamento iterativo estende a abordagem de multiplexidade

The spatial heterogeneity of the tumor microenvironment (TME) is a critical determinant of therapeutic response, particularly for immune-oncology agents, ...

three-dimensional-imaging-tumor-bearing-tissue-using-iterative

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Uma visão abrangente das técnicas envolvidas na geração de um modelo do rato de câncer oral e monitorização quantitativa de invasão tumoral dentro da língua por meio de microscopia multi-fotão de células marcadas é apresentado. Este sistema pode servir como uma plataforma útil para a avaliação molecular e eficácia de drogas anti-invasivos compostos.

Multi-fotão imagem de invasão das células tumorais em um modelo de camundongo ortotópico de carcinoma epidermóide oral

Massas de tecido complexos, a partir de órgãos de tumores, são compostas de vários elementos celulares. Nós elucidada a contribuição de fenótipos celulares dentro de um tecido utilizando ratinhos transgénicos fluorescentes multi-marcados em combinação com coloração de imunofluorescência multiparamï seguido de separação espectral para decifrar origem celular, bem como características de células com base na expressão da proteína.

Análise Quantitativa Multispectral Após transplante de tecido fluorescente para visualização das Origens celulares, Tipos e Interações

Combinatória 5 proteínas fluorescentes marcação de células-tronco e progenitoras hematopoiéticas permite in vivo de rastreamento via clonal confocal e microscopia de dois fótons, fornecendo insights sobre medula óssea hematopoiética arquitetura durante a regeneração. Este método permite o mapeamento destino não-invasivo de espectro codificados células hspCs derivados em tecidos intactos por longos períodos de tempo após o transplante.

In vivo Clonal Rastreamento de Stem hematopoiéticas e células progenitoras Marcado por cinco proteínas fluorescentes usando confocal e microscopia multifotônica

Este protocolo descreve o uso de microscopia multifotônica para executar imagiologia prolongado de lapso de tempo de interacções multicelulares em tempo real, in vivo, a resolução de células simples.

Estendida Time-lapse Imagem intravital do Real-time multicelular Dynamics no microambiente tumoral

Tomografia de coerência óptica (OCT), uma tecnologia de imagem tridimensional, foi usada para monitorar e caracterizar a cinética de crescimento de esferoides tumor multicelulares. Precisa quantificação volumétrica de esferoides tumor usando um voxel contando a abordagem e deteção de tecido livre de rótulo morto nos esferoides baseado no contraste intrínseco atenuação óptica, foram demonstradas.

Longitudinal de morfológicas e fisiológicas, monitoramento de esferoides Tumor tridimensional usando a tomografia de coerência óptica

Aqui nós descrevemos um método para a imagem latente high-resolution do multifotônica do tempo-lapso de pilhas do tumor cerebral antes e depois da intervenção cirúrgica invasora (por exemplo, biópsia) dentro do mesmo animal vivo. Este método permite estudar o impacto destes procedimentos cirúrgicos invasivos no comportamento migratório, invasivo e proliferativo das células tumorais em um único nível de células.

Imagem latente longitudinal de intravital do comportamento da pilha do tumor cerebral em resposta a uma biópsia cirúrgica invasora

Na era da imunoterapia contra o câncer, o interesse em elucidar a dinâmica do microambiente tumoral aumentou de forma impressionante. Este protocolo detalha uma técnica de imagem de espectrometria de massa em relação às suas etapas de coloração e imagem, que permitem uma análise espacial altamente multiplexada.

Expandindo a compreensão do microambiente tumoral usando imagens de espectrometria de massa de amostras de tecido fixo e parafina

Apresentamos aqui uma técnica de ultrassom 5D combinando reconstrução 3D multiplanar e fusão com Doppler colorido, que permite a visualização sincrônica de informações estruturais e funcionais da tireoide. Ao minimizar os pontos cegos, esse método permite a localização rápida e precisa das lesões para melhorar a acurácia diagnóstica, beneficiando especialmente os profissionais iniciantes.

Reconstrução Triplanar Síncrona Integrada ao Mapeamento Doppler Colorido para Localização Precisa e Rápida das Lesões Tireoidianas

Mapas quantitativos de oxigênio 3D de tumores murinos foram fotografados de forma não invasiva usando ressonância paramagnética eletrônica de pulso. Ultrassom modo B e Power Doppler foram usados para anatomia e estrutura vascular. As imagens de ambas as modalidades foram sobrepostas, permitindo a análise multiparamétrica do tumor.

Avaliação da hipóxia tumoral: imagens de oxigênio 3D in vivo por ressonância paramagnética eletrônica 

Aqui, descrevemos a aplicação do método Iterative Bleaching Extends Multiplicity (IBEX) utilizando corantes de tecidos automatizados disponíveis comercialmente e considerações de otimização para o uso de reagentes baseados em amplificação de sinal de tiramida.

O branqueamento iterativo amplia a multiplicidade com o uso da automação de coloração para instalações principais

A implementação de uma técnica de fotoirradiação versátil e de baixo custo com o método IBEX manual permite imagens ideais de tecido humano com autofluorescência nativa significativa. Este protocolo detalha como obter imagens multiplexadas de lâminas inteiras de amostras clínicas arquivadas usando um microscópio invertido, reagentes amplamente disponíveis e software de código aberto para alinhamento e processamento de imagens.

Fluxo de trabalho otimizado para branqueamento iterativo amplia a imagem de multiplexidade de amostras clínicas altamente autofluorescentes

Aprenda a otimizar imunofluorescência multiplex para caracterizar a arquitetura tridimensional de metástases peritoneais. Este protocolo estende a análise além de seções bidimensionais, revelando a distribuição espacial de marcadores imunes e estruturais.

Imagens tridimensionais de tecido portador de tumor usando o clareamento iterativo estende a abordagem de multiplexidade

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