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Preparação Automatizada de Amostras para a Análise Multiplexada de Modificações Pós-Traducionais ...
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JoVE Journal Biochemistry
Automated Sample Preparation for the Multiplexed Analysis of Single-Cell Histone Post-Translational Modifications (sc-hPTM2)

Preparação Automatizada de Amostras para a Análise Multiplexada de Modificações Pós-Traducionais de Histonas de Célula Única (sc-hPTM2)

Full Text
30,117 Views
07:21 min
December 19, 2025

DOI: 10.3791/69588-v

Giulia Barotti1, Ronald Cutler1, Joshua Cantlon2, Barbara Montanini3, Simone Sidoli1

1Albert Einstein College of Medicine, 2SCIENION, 3Department of Chemical, Life and Environmental Sustainability Sciences,University of Parma

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Aqui, apresentamos um protocolo para automatizar a análise de modificação pós-translacional de histonas de célula única usando uma estratégia de rotulagem isotópica de dois plexos e digestão com ArgC. Esse fluxo de trabalho permite um perfil quantitativo, reproduzível e de alta sensibilidade da heterogeneidade da cromatina e respostas epigenéticas em resolução de célula única.

Estamos avançando a proteômica de célula única com um método automatizado de multiplexação para estudar a heterogeneidade global da cromatina para modificações pós-traducionais. O que torna esse protocolo desafiador é a preparação proteômica em escala picograma, a marcação multiplex, bem como a resolução de peptidos histonas modificados combinatórios complexos. Para começar, reconstitua as células hepatocelulares do carcinoma Hep G2/C3A em uma concentração final de 200 a 500 células por microlitro em PBS gelado.

Ajuste a largura de pulso e a tensão de acionamento de cada bico nos valores fornecidos pelo fabricante. Para máxima eficiência do captador, certifique-se de que o deslocamento Z entre os dois bicos diferia em menos de 50 micrômetros. Identifique a posição ótima de contato para cada bico e compare as leituras de altura Z na aba de configuração do bico.

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Bioquímica Edição 226 modificações pós-transacionais de histonas proteômica de célula única espectrometria de massas epigenética cromatina marcação isotópica butirato de sódio carcinoma hepatocelular esferoide

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