JoVE Encyclopedia of Experiments
Биология
0 просмотров • 2:52 мин • April 30th, 2023
- Начните с емкости для случки, емкости со съемной вставкой, которая позволяет яйцам проваливаться сквозь них. Добавьте двух самцов и трех взрослых самок рыб в разделенный брачный аквариум вечером перед сбором эмбрионов, чтобы они акклиматизировались друг к другу на ночь.
На следующее утро пересадите рыб в новый резервуар для спаривания, содержащий воду из системы, и снимите разделитель. Подождите от 15 до 30 минут, чтобы дать рыбе время для спаривания и нереста.
Теперь соберите эмбрионы и храните их в чашке Петри, содержащей среду для эмбрионов Хэнка. Выращивайте их при температуре 28,5 градусов по Цельсию на протяжении всего протокола. Изучите морфологию эмбрионов под исследуемым микроскопом.
Вы заметите несколько особенностей развития. Расщепление бластодиска приводит к образованию нескольких клеток. Бластодерма имеет форму перевернутой чашечки над желточной клеткой. Параксиальные сегменты мезодермы развиваются на дорсальной части эмбриона и так далее.
Через 24 часа после оплодотворения просто отсортируйте эмбрионы по общей длине тела. В примере протокола мы настроим спаривание трансгенных рыб-репортеров mCherry и отсортируем полученные эмбрионы.
- Для начала культивируйте эмбрионы до трехмесячного возраста, который является репродуктивной зрелостью. Отделите двух взрослых самцов и трех самок рыб от нужного штамма в отдельные брачные резервуары с пресной водой системы вечером накануне сбора эмбрионов. На следующее утро после того, как зажгется свет, снимите разделитель и дайте рыбам спариваться естественным образом, пока на дне аквариума не будут замечены эмбрионы.
Соберите эмбрионы с интервалом в 30 минут и разделите чашки Петри с эмбриональной средой до тех пор, пока не будет собрано нужное количество. Чтобы определить стадию эмбрионов, культивируйте их в группах от 50 до 75 на 10-сантиметровую чашку Петри, чтобы обеспечить согласованное время развития всех эмбрионов. Затем держите тарелки при температуре 28,5 градусов по Цельсию.
Измерьте возраст эмбриона с помощью сомитного числа после сегментации примерно через 24 часа после оплодотворения или HPF и разделите эмбрионы в зависимости от возраста развития.
В данной статье описан протокол скрещивания и сбора эмбрионов рыб с акцентом на стадии их развития. В ней представлены подробные этапы акклиматизации рыб, сбора эмбрионов и изучения их морфологии.
Точное получение и определение стадий развития эмбрионов zebrafish имеют основополагающее значение для исследований на этапе поиска, требующих синхронизированного биологического материала. Данный протокол позволяет надежно изолировать эмбрионы на определенных стадиях, что необходимо для последующего применения, такого как трансгенный анализ и количественное профилирование экспрессии генов. Стандартизация стадий развития эмбрионов повышает прогностическую достоверность и воспроизводимость результатов в рамках ранних этапов поиска и доклинических исследований.
Данный метод применяется на стыке этапов раннего поиска и доклинических исследований, позволяя получать высококачественные эмбрионы соответствующей стадии развития для генетического, молекулярного и фенотипического анализа.
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Последнее обновление: 29 августа 2026