Спаривание и стадирование яиц: метод получения эмбрионов и их сортировки по стадиям развития

- Начните с емкости для случки, емкости со съемной вставкой, которая позволяет яйцам проваливаться сквозь них. Добавьте двух самцов и трех взрослых самок рыб в разделенный брачный аквариум вечером перед сбором эмбрионов, чтобы они акклиматизировались друг к другу на ночь.

На следующее утро пересадите рыб в новый резервуар для спаривания, содержащий воду из системы, и снимите разделитель. Подождите от 15 до 30 минут, чтобы дать рыбе время для спаривания и нереста.

Теперь соберите эмбрионы и храните их в чашке Петри, содержащей среду для эмбрионов Хэнка. Выращивайте их при температуре 28,5 градусов по Цельсию на протяжении всего протокола. Изучите морфологию эмбрионов под исследуемым микроскопом.

Вы заметите несколько особенностей развития. Расщепление бластодиска приводит к образованию нескольких клеток. Бластодерма имеет форму перевернутой чашечки над желточной клеткой. Параксиальные сегменты мезодермы развиваются на дорсальной части эмбриона и так далее.

Через 24 часа после оплодотворения просто отсортируйте эмбрионы по общей длине тела. В примере протокола мы настроим спаривание трансгенных рыб-репортеров mCherry и отсортируем полученные эмбрионы.

- Для начала культивируйте эмбри