Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 3:25 мин. • April 30th, 2023
- Морфология субстрата сильно влияет на поведение раковых клеток и метастатические реакции. Динамическая сеть актинового цитоскелета обеспечивает структурную поддержку клеток и опосредует клеточное движение. Большие мембраноассоциированные белковые комплексы, называемые фокальными адгезиями, соединяют цитоскелет с внеклеточным матриксом, способствуя распространению клеток.
Чтобы начать окрашивание, возьмите культуру раковых клеток и обработайте ее параформальдегидом для фиксации и проникновения клеток. Теперь инкубируйте клетки с реагентом-усилителем сигнала, содержащим белки, чтобы подготовить клетки к снижению фонового окрашивания. Добавьте первичные антитела против винкулина, которые связываются с винкулином, одним из белков в составе комплекса фокальной адгезии.
Затем инкубируйте образец с флуоресцентным вторичным антителом, конъюгированным с красителем, нацеленным на первичное антитело. Наконец, обработайте клетки флуоресцентными мечеными фаллоидиновыми конъюгатами, которые избирательно связываются с актиновыми филаментами цитоскелета. Наблюдайте за клетками под конфокальным лазерным сканирующим микроскопом, чтобы изучить их флуоресцентные сигналы.
Клетки с хорошо распределенн
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео