Фазово-контрастная микроскопия для оценки мутантов развития у Streptomyces

Начните с агаровых пластин, содержащих колонии диких и мутантных штаммов Streptomyces coelicolor, нитчатой почвенной бактерии.

Поместите стерильный покровный лист над областью плотного роста колонии, где хорошо видны воздушные нити, которые представляют собой нити, простирающиеся над поверхностью колонии.

Осторожно нажмите на покровное стекло, чтобы перенести воздушные нити и связанные с ними споры на поверхность покровного стекла.

Затем возьмите предметное стекло микроскопа с монтажным материалом и установите покровное стекло ячейкой вниз, чтобы сохранить бактериальные структуры.

Поместите предметное стекло на предметный столик для микроскопа, добавьте каплю иммерсионного масла на покровное стекло и выровняйте объектив.

С помощью фазово-контрастной микроскопии можно получить изображения воздушных нитей как дикого типа, так и мутантных штаммов.

Нити дикого типа имеют равномерно расположенные по размеру споры.

Напротив, мутантные штаммы демонстрируют дефекты, такие как выпуклые нити, нерегулярные споры или лизированные споры, что выявляет фенотипические различия в развитии между диким типом и мутантами.

Чтобы подготовить покровное стекло для снятия бактериального роста, используйте стерильный пинцет, чтобы взять стерильный покровный лист и поместить его на агаровую пластину MS, где наблюдается интенсивный рост бактерий. С помощью пинцета аккуратно надавите на заднюю сторону покровного стекла, чтобы обеспечить достаточный перенос бактериальных спор и воздушного мицелия. Возьмите покровное стекло с пластины и поместите его под углом 45 градусов так, чтобы материал клетки был обращен к поверхности предметного стекла микроскопа, содержащего каплю 50% глицерина объемом 15 микролитров.

Дайте покровному стеколу упасть на глицерин, который уменьшит количество пузырьков воздуха. Для проведения фазово-контрастной микроскопии через различные промежутки времени поместите подготовленное предметное стекло на предметный столик микроскопа и добавьте каплю иммерсионного масла в центр покровного стекла. Поверните фазовый объектив в 100 раз на место и установите револьверную головку конденсатора на правильную правильную настройку фазы.

Когда линза объектива соприкоснется с маслом, для фокусировки изображения используйте только ручку точной регулировки. Изучите несколько полей зрения, чтобы различить заметные и последовательные различия между мутантными штаммами и диким типом. Например, способность образовывать споры, размер и форма спор, а также общее количество спор.