Визуализация инфекции мочевыводящих путей в модели мыши с использованием биолюминесценции

Начните с анестезиированной мыши и с помощью катетера введите суспензию патогенных бактерий в мочевой пузырь.

Эти бактерии несут биолюминесцентный оперон, который позволяет автономно вырабатывать свет для отслеживания инфекции.

Внутренняя оболочка мочевого пузыря представляет собой специализированный эпителий, который отделяет просвет от подлежащей ткани.

Бактериальные адгезионные белки связываются с гликопротеиновыми рецепторами на поверхности эпителия хозяина, вызывая эндоцитоз, опосредованный рецепторами.

Внутренние бактерии размножаются, образуя плотные внутриклеточные бактериальные сообщества.

Бактерии экспрессируют биолюминесцентный оперон, образуя фермент люциферазы и ферментный комплекс, синтезирующий субстрат люциферазы.

Люцифераза окисляет субстрат, испуская видимый свет.

Разместите мышь внутри камеры визуализации и зафиксируйте биолюминесцентный сигнал.

Выберите интересующую область и количественно оцените интенсивность биолюминесценции.

Отслеживайте этот сигнал во времени как индикатор бактериальной нагрузки и прогрессирования инфекции в реальном времени.

Откройте программное обеспечение для получения BLI и нажмите Initialize в устройстве изображения, чтобы протестировать камеру и систему контроллера сцены, а также охладить камеру устройства с зарядом до минус 90 градусов Цельсия. Нажмите на Acquisition, AutoSave To. Выберите «Люминесценция» и «Сфотографировать». Проверьте стандартные люминесцентные настройки, установив фильтр возбуждения на Block и фильтр излучения на Open.

При первой фотографии установите время экспозиции на автомат. Для измерений in vivo и ярких сигналов установите время экспозиции примерно на 30 секунд. Сократьте время экспозиции, если появляется предупреждение из-за насыщенного изображения.

Выберите средний биннинг, F/стоп один, и выберите правильный FOV. При съёмке мышей установите высоту объекта на 1 сантиметр. Сфотографируйте до 5 мышей одновременно и разделите животных с помощью светового перегородки, чтобы предотвратить отражение.

Закройте дверь и нажмите «Приобрети», чтобы начать последовательность изображений. Затем заполните подробную информацию об эксперименте. Выведите мышей из камеры для визуализации и верните их в клетку. Проверьте полное восстановление после наркоза. Затем возвращайте клетки на вентилируемые стойки до следующего цикла съёмок.

Запустите программу для визуализации и загрузите экспериментальный файл, нажав на Browse. Используйте палитру инструментов для настройки цветовой шкалы изображения. Используйте инструменты ROI, чтобы нарисовать интересующую область на изображении, убедившись, что она достаточно большая, чтобы покрыть всю область, и использовать одинаковые размеры для всех изображений. Затем нажмите на измерение ROI, чтобы количественно определить интенсивность света.