Визуализация распределения бактериального белка в трёх измерениях с помощью флуоресцентной визуализации

Начните с герметичного стекла с бактериальными клетками, маркированными цитоплазматическим красным флуоресцентным маркером и белок-специфическим зелёным флуоресцентным маркером.

Осмотрите слайд под флуоресцентным микроскопом.

Определите поле с хорошо изолированными бактериальными клетками и сосредоточьтесь на центре представительной клетки.

Установите первый флуоресцентный канал и получите z-стековое изображение с определёнными параметрами, чтобы запечатлеть трёхмерную форму представительной ячейки и её близлежащих клеток.

Затем переключитесь на второй флуоресцентный канал и получите другое z-стековое изображение тех же ячеек с теми же параметрами.

Он захватывает распределение бактериальных белков внутри клеток.

Вырезать отдельные клетки из каждого z-стека для их выделения для анализа по одной ячейке.

Выровняйте эти изображения, чтобы визуализировать распределение бактериальных белков относительно формы клетки, что позволяет проводить точный анализ во время взаимодействия хозяина и патогена.

Сразу после герметизации крышки поставьте затвор на ступень микроскопа, а после пяти минут термического равновесия используйте фокусные колёса микроскопа, чтобы привести центр клетки в фокус. В соответ