Выделение мононуклеарных клеток из мозга мыши: метод центрифугирования с градиентом плотности для выделения резидентных мононуклеарных клеток мозга

Мононуклеарные клетки в мозге, состоящие из лимфоцитов и моноцитов, играют решающую роль в поддержании функции мозга и гомеостаза.

Чтобы выделить эти мононуклеарные клетки, сначала возьмут свежесобранный мозг мыши, пропитанный физиологическим раствором.

Перфузия позволяет удалять кровь и ее компоненты из кровеносных сосудов, что позволяет изолировать резидентные иммунные клетки мозга на последующих этапах.

Теперь промойте мозг подходящей средой, чтобы удалить прилипшие эритроциты. После полоскания пропустите через мясорубку, чтобы приобрести мелкие кусочки ткани.

Гомогенизируйте кусочки ткани для получения суспензии из отдельных клеток и фрагментов клеток.

В эту суспензию затем добавьте охлажденную среду и подходящую градиентную среду плотности в соответствующих объемах для формирования градиентной среды низкой плотности.

Затем добавьте определенный объем градиентной среды высокой плотности; градиентная среда высокой плотности образует отдельный слой на дне, создавая прерывистый градиент плотности.

Центрифугируйте суспензию на высоких оборотах и в условиях низких температур. Мононуклеарные ячейки занимают границу между двумя слоями среды с градиентом плотности.

Откажитесь от верхне