Сывороточный бактерицидный анализ на комплемент-опосредованную бактерицидную активность антител
Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 5:40 мин. • July 8th, 2025
Возьмите серийно разведенный образец сыворотки, содержащий моноклональные антитела против липополисахаридов, или ЛПС — компонента внешней мембраны грамотрицательных бактерий.
Вводите грамотрицательные бактерии. Сывороточные антитела связываются с бактериальным ЛПС.
Добавьте белки комплемента. Комплекс С1 связывается с ЛПС-связанными антителами, образуя ферментативно активный С1.
Активированный С1 расщепляет С4 и С2 с образованием С3-конвертазы, которая расщепляет С3 с образованием С5-конвертазы. Конвертаза расщепляет C5 с образованием C5b, который рекрутирует C6 и C7. Полученный комплекс встраивается в наружную оболочку и связывается с С8 и кратным С9, образуя пору.
Повреждение внешней мембраны дестабилизирует внутреннюю мембрану, вызывая лизис клеток.
Выложите смесь на агаровую пластину и выложите. Инкубируйте для роста бактерий. Нанесите на пластину агар, содержащий трифенилтетразолия хлорид, или ТТК, который восстанавливается микробными дегидрогеназами, придавая колонии бактерий красный цвет.
Количество колоний увеличивается при разведении образца, что указывает на снижение бактерицидной активности при более низкой концентрации антител.
Для начала инкубируйте образцы на теплой в
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео