Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 3:34 мин. • July 8th, 2025
Возьмите камерное покровное стекло, содержащее тучные клетки — иммунные клетки с секреторными гранулами, или SG, содержащие медиаторы воспаления.
Добавьте антитела IgE вместе с pH-чувствительным флуоресцентным репортером и инкубируйте.
Антитела связываются с Fc-рецепторами на тучных клетках. Репортеры интернализуются с помощью пиноцитоза, и полученные эндосомы сливаются с СГ.
Извлеките носитель. Добавить антиген, содержащий несколько IgE-связывающих эпитопов; Поместите предметное стекло под флуоресцентный микроскоп и примените необходимую длину волны возбуждения.
Кислый pH SGs гасит флуоресценцию репортера.
Антиген связывается с комплексами IgE-рецепторов на поверхности клетки, сшивая их.
Агрегация антиген-опосредованных рецепторов вызывает миграцию SG к плазматической мембране.
Белки SNARE на плазматической и SG-мембране опосредуют слияние мембран и высвобождение SG-груза, что называется экзоцитозом.
Более высокий pH среды вызывает подщелачивание SG, заставляя репортеры восстанавливать флуоресценцию.
Поступающие СГ сливаются с мембранно-расплавленными. Подщелачивание второго SG опосредует восстановление флуоресценции, подтверждая экзоцитоз соединения.
Добавьте 10 микролитров клето
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео