Метод фотоконверсии для изучения динамики воспалительных клеток в куколках насекомых

Начните с чашки со стеклянным дном, содержащей трансгенных куколок дрозофилы, несущих меченый раненый эпителий с белками клеточной поверхности, демонстрирующими зеленую флуоресценцию.

Иммунные клетки куколок — или гемоциты — экспрессируют фотоконвертируемые зеленые флуорофоры в цитоплазме и красные флуоресцентные белки в ядре, облегчая отслеживание клеток.

Поврежденные клетки выделяют хемоаттрактанты — или воспалительные молекулы, привлекая гемоциты к поврежденному участку.

Конфокальная микроскопия выявляет раненый участок, окруженный зелеными эпителиальными клетками.

В процессе заживления зеленые гемоциты с красными ядрами вблизи раны удлиняют мембранные выступы — филоподии и ламелиподии и мигрируют в сторону раневой области.

Со временем, по мере диффузии хемоаттрактанта, отдаленные гемоциты мигрируют к ране, создавая иммунную клеточную волну.

Осветите субпопуляцию мигрирующих гемоцитов с помощью волны 405 нанометров. Это необратимо преобразует фотоконвертируемый флуорофор гемоцитов из зеленого в красный.

Эти фотоконвертированные гемоциты восстанавливают поврежденный эпителий и удаляются от места раны, дифференцируя фотоконвертированные гемоциты от нефотоконвертированных гемоцитов