Выделение нескольких типов клеток из мозга мыши путем механической гомогенизации

0 views • 3:27 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Начните с размещения компонентов измельчителя на льду. Это устройство включает в себя ступку и два пестика разного диаметра.

Насыпьте в раствор охлажденный солевой буфер, а затем добавьте мозговую ткань мыши.

Буфер поддерживает осмотический баланс, сохраняя структуру и функцию клеток.

Измельчите ткань несколькими легкими движениями с помощью пестика меньшего диаметра, который механически разрезает ткань на более мелкие кусочки.

Далее ударьте пестиком большего диаметра, способствуя дальнейшему расщеплению ткани на составляющие ее клетки.

Переложите смесь в пробирку и центрифугу.

Удалите надосадочную жидкость.

Добавьте охлажденную соль в буфер и сделайте воркс, чтобы разбить клеточные комки и миелин.

Далее добавляем градиент плотности среды и центрифугу.

Из-за различий в форме и массе клетки будут селиться в нижнем слое, в то время как мусор и миелин накапливаются в верхнем слое.

Выбросьте надосадочную жидкость.

Добавьте подходящий раствор, чтобы получить многоклеточную суспензию для дальнейшего использования.

Для гомогенизации тканей добавьте 3 миллилитра предварительно охлажденного HBSS в предварительно охлажденный стеклянный раствор измельчителя тканей Dounce и перенесите половину одного из собранных мозгов в ступку. Аккуратно вымочите ткань 10 ударами пестика А, а затем 10 ударами пестика В, и переложите гомогенизированную смесь в новую 15-миллилитровую коническую трубку.

Заполните пробирку до конечного объема 10 миллилитров предварительно охлажденным HBSS для центрифугирования и повторно суспендируйте гранулу в 7 миллилитрах свежего HBSS с вортексированием перед удержанием образца на льду. Для удаления мусора добавьте 3 миллилитра предварительно охлажденного изотонического раствора в каждый переваренный или гомогенизированный образец и осторожно перемешайте образцы, чтобы убедиться, что они однородно перемешаны.

Далее центрифугируйте образцы и аккуратно удалите белесый диск из мусора и миелина, плавающий на поверхности раствора. Когда мусор будет выброшен, соберите все, кроме последних 100 микролитров надосадочной жидкости из каждой пробирки, не повреждая гранулы. Ресуспендируйте каждую гранулу в 1 миллилитр раствора FACS/BL для переноса в отдельные микроцентрифужные пробирки объемом 1,5 миллилитров.

После центрифугирования раствором частиц важно очень осторожно удалить диск мусора и надосадочную жидкость, не смещая клеточную гранулу, чтобы избежать потери пробы.

После центрифугирования осторожно отасуньте надосадочную жидкость из каждой пробирки и повторно суспендируйте гранулы в 350 микролитрах свежего FACS/BL на пробирку.

09:49

Изоляция региона конкретных микроглии от одного взрослого полушария мозга мыши для глубокой одноклеточной РНК секвенирования

Related Videos

0 Views

04:53

Выделение первичной микроглии мыши методом магнитно-активированной сортировки клеток на животных моделях демиелинизации

Related Videos

0 Views

06:52

Метод «доения мозга» для выделения нейральных стволовых клеток и клеток-предшественников олигодендроцитов из живых крыс

Related Videos

0 Views

04:11

Выделение мононуклеарных клеток из мозга мыши: метод центрифугирования с градиентом плотности для выделения резидентных мононуклеарных клеток мозга

Related Videos

0 Views

03:48

Выделение микроглии из коры головного мозга взрослой мыши

Related Videos

0 Views

10:21

Характеристика и изоляция первичной микроглии мыши по плотности градиентного центрифугирования

Related Videos

0 Views

10:24

Одновременное циклометрическое использование потока нескольких типов клеток, извлеченных из мозга мыши / спинного мозга с помощью различных методов гомогенизации

Related Videos

0 Views

06:49

Высокий метод выхода для изоляции церебральных перицитов от мыши

Related Videos

0 Views

07:14

Комбинированная механическая и ферментативная диссоциация ткани гиппокампа мозга мыши

Related Videos

0 Views

07:10

Количественная оценка глобальных посттрансляционных модификаций гистонов с помощью внутриядерной проточной цитометрии в изолированной микроглии головного мозга мышей

Related Videos

0 Views

Last updated: 27 June 2026