Оценка нейронных сетей в срезах спинного мозга мышей на основе микроэлектродной матрицы

Возьмем микроэлектродную решетку, или МЭА, ну, содержащую aCSF. Поместите срез спинного мозга мыши в лунку и закрепите его утяжеленной сеткой.

Поместите лунку MEA в записывающую систему. Под микроскопом обеспечьте максимальный контакт между электродами MEA и поверхностным тыловым рогом или SDH, областью, богатой интернейронами.

Поддерживайте непрерывный поток спинномозговой жидкости для балансировки ткани.

Нейроны взаимодействуют с помощью потенциалов действия. Приток ионов натрия деполяризует мембрану, за которым следует отток ионов калия, вызывающий реполяризацию. Мембрана на короткое время гиперполяризуется, препятствуя возникновению нового потенциала действия до тех пор, пока потенциал покоя не восстановится.

Записывайте спонтанную активность нейронов с электродов MEA. Сигналы, проходящие одновременно по нескольким электродам, указывают на сеть синаптически связанных нейронов.

Введите ингибитор калиевых каналов для продления деполяризации, что приводит к увеличению частоты потенциала действия и синхронной ритмической активности по всей сети.

Большее количество электродов, показывающих совпадающие сигналы, указывает на синхронную активность, опосредованную ингибиторами.

Чтобы начать регистрацию активности дорсального рога, перенесите срез из инкубатора в лунку MEA с помощью пипетки Пастера с большим наконечником, наполненной искусственной спинномозговой жидкостью, и добавьте дополнительные искусственные спинномозговые жидкости.

Используйте тонкую кисть с коротким ворсом, чтобы расположить срез над 60-электродной записывающей матрицей. Затем наденьте на ткань утяжеленную сетку, чтобы удерживать ее на месте и обеспечить хороший контакт с электродами MEA.

Поместите MEA в столик записывающей головки. Проверьте положение ткани над электродами с помощью инвертированного микроскопа, чтобы убедиться, что как можно больше электродов находится под поверхностным ДД. Убедитесь, что от двух до шести электродов не соприкасаются со срезом.

После подключения камеры к устройству сделайте эталонное изображение среза относительно MEA для использования во время анализа. Затем нажмите «Запустить сбор данных» в программном обеспечении для записи и убедитесь, что все электроды получают чистый сигнал.

Затем подсоедините входной и выходной линии перфузии к лунке MEA, заполненной искусственным ликвором, и включите систему перфузии. Проверьте скорость потока и убедитесь, что отток достаточен для предотвращения переполнения суперфузата. После балансировки ткани в течение пяти минут записывайте исходные исходные данные в течение пяти минут.

Переместите входную линию перфузии из искусственной спинномозговой жидкости в раствор 4-аминопиридина и подождите 12 минут, пока ритмическая активность, индуцированная 4-аминопиридином, не достигнет устойчивого состояния. Затем запишите 5 минут активности, индуцированной 4-аминопиридином, и будьте готовы к последующим записям, чтобы протестировать препараты или проверить стабильность 4-аминопиридина.