Why does null hypothesis testing matter for SEM-based choroid plexus validation?

Null hypothesis testing ensures that observed ultrastructural differences in choroid plexus morphology are statistically significant, supporting robust target validation and reducing false positives in early discovery.

How does independent variable isolation fit SEM tissue preparation workflows?

Isolating variables such as fixation time, dehydration gradients, and coating thickness allows teams to attribute morphological outcomes specifically to experimental manipulations, enhancing reproducibility and interpretability.

What do quantitative SEM measurements of microvilli enable in R&D?

Quantitative assessment of microvilli density and epithelial integrity provides objective benchmarks for comparing healthy and diseased tissue, informing model selection and translational alignment.

Why are replication requirements critical for cross-functional SEM studies?

Replication ensures that morphological findings are consistent across samples and operators, enabling reliable data sharing and decision-making between discovery, screening, and translational teams.

Which statistical analysis capabilities are required before SEM imaging implementation?

Teams must establish protocols for quantitative image analysis and statistical comparison of morphological features to ensure that SEM outputs support actionable R&D decisions and portfolio advancement.

Визуализация сосудистого сплетения головного мозга мыши с помощью сканирующей электронной микроскопии

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 views • 2:23 min • June 17th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Возьмите сосудистое сплетение из мозга мыши в корзине для образцов.

Ткань, расположенная в желудочках мозга, содержит слой эпителиальных клеток с микроворсинками на их апикальной поверхности.

Инкубируйте ткань в фиксирующем растворе, чтобы сохранить ее клеточную архитектуру.

Промойте буфером, чтобы удалить излишки фиксатора и стабилизировать pH.

Инкубируйте ткань с тетраоксидом осмия, который связывается с липидами клеточной мембраны, сохраняя стабильность мембраны, затем смойте излишки реагента.

Обезвоживайте ткань с помощью увеличения концентрации спирта, чтобы предотвратить деформацию тканей во время визуализации.

Высушите ткань, закрепите ее на креплении для образца с углеродным покрытием, затем покройте ее проводящим слоем платины.

С помощью сканирующей электронной микроскопии сфокусируйте электронный луч на поверхность. Платиновый слой рассеивает электроны, предотвращая накопление заряда и сводя к минимуму артефакты изображения.

Детектор улавливает электроны, рассеянные от поверхности, создавая изображение ткани с эпителиальными клетками с микроворсинками.

Для проведения пробоподготовки к СЭМ необходимо перевести только что выделенное сосудистое сплетение в свежеприготовленный фиксирующий раствор и инкубировать в течение ночи при температуре 4 градуса Цельсия. После этого промойте образец три раза, используя от 3 до 5 миллилитров 0,1 молярного буфера какодилата натрия в течение пяти минут каждый.

После этого зафиксируйте образцы в 3-5 миллилитрах 2% тетраоксида осмия в 0,1 молярном буфере какодилата натрия в течение 30 минут. Затем промойте образцы три раза по пять минут каждый, используя от 3 до 5 миллилитров сверхчистой воды. Затем обезвоживайте образцы в возрастающей серии ледяных концентраций этилового спирта в течение 15 минут на раствор этилового спирта. Используйте сушилку для критических точек, чтобы правильно высушить образец. Осторожно расположите образец на креплении для образца с помощью карбоновой наклейки и визуализируйте образцы сосудистого сплетения с помощью СЭМ.