Что такое хороидальное сплетение?

Хороидальное сплетение — это сеть клеток в желудочках мозга, отвечающих за производство цереброспинальной жидкости.

Почему фиксация важна в подготовке образца?

Фиксация сохраняет клеточную структуру и предотвращает разрушение на последующих этапах обработки.

Какую роль играет тетраоксид осмии в протоколе?

Тетраоксид осмии связывается с липидами клеточных мембран, стабилизируя их для лучшей визуализации.

Как дегидратация влияет на тканевые образцы?

Дегидратация предотвращает искажение структуры ткани при визуализации путем удаления содержания воды.

Какая цель нанесения на образец платинового покрытия?

Платиновый слой рассеивает электроны во время СМИ, предотвращая накопление заряда и минимизируя артефакты изображения.

Визуализация сосудистого сплетения головного мозга мыши с помощью сканирующей электронной микроскопии

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 views • 2:23 min • June 17th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Возьмите сосудистое сплетение из мозга мыши в корзине для образцов.

Ткань, расположенная в желудочках мозга, содержит слой эпителиальных клеток с микроворсинками на их апикальной поверхности.

Инкубируйте ткань в фиксирующем растворе, чтобы сохранить ее клеточную архитектуру.

Промойте буфером, чтобы удалить излишки фиксатора и стабилизировать pH.

Инкубируйте ткань с тетраоксидом осмия, который связывается с липидами клеточной мембраны, сохраняя стабильность мембраны, затем смойте излишки реагента.

Обезвоживайте ткань с помощью увеличения концентрации спирта, чтобы предотвратить деформацию тканей во время визуализации.

Высушите ткань, закрепите ее на креплении для образца с углеродным покрытием, затем покройте ее проводящим слоем платины.

С помощью сканирующей электронной микроскопии сфокусируйте электронный луч на поверхность. Платиновый слой рассеивает электроны, предотвращая накопление заряда и сводя к минимуму артефакты изображения.

Детектор улавливает электроны, рассеянные от поверхности, создавая изображение ткани с эпителиальными клетками с микроворсинками.

Для проведения пробоподготовки к СЭМ необходимо перевести только что выделенное сосудистое сплетение в свежеприготовленный фиксирующий раствор и инкубировать в течение ночи при температуре 4 градуса Цельсия. После этого промойте образец три раза, используя от 3 до 5 миллилитров 0,1 молярного буфера какодилата натрия в течение пяти минут каждый.

После этого зафиксируйте образцы в 3-5 миллилитрах 2% тетраоксида осмия в 0,1 молярном буфере какодилата натрия в течение 30 минут. Затем промойте образцы три раза по пять минут каждый, используя от 3 до 5 миллилитров сверхчистой воды. Затем обезвоживайте образцы в возрастающей серии ледяных концентраций этилового спирта в течение 15 минут на раствор этилового спирта. Используйте сушилку для критических точек, чтобы правильно высушить образец. Осторожно расположите образец на креплении для образца с помощью карбоновой наклейки и визуализируйте образцы сосудистого сплетения с помощью СЭМ.