Визуализация сосудистого сплетения головного мозга мыши с помощью сканирующей электронной микроскопии

Возьмите сосудистое сплетение из мозга мыши в корзине для образцов.

Ткань, расположенная в желудочках мозга, содержит слой эпителиальных клеток с микроворсинками на их апикальной поверхности.

Инкубируйте ткань в фиксирующем растворе, чтобы сохранить ее клеточную архитектуру.

Промойте буфером, чтобы удалить излишки фиксатора и стабилизировать pH.

Инкубируйте ткань с тетраоксидом осмия, который связывается с липидами клеточной мембраны, сохраняя стабильность мембраны, затем смойте излишки реагента.

Обезвоживайте ткань с помощью увеличения концентрации спирта, чтобы предотвратить деформацию тканей во время визуализации.

Высушите ткань, закрепите ее на креплении для образца с углеродным покрытием, затем покройте ее проводящим слоем платины.

С помощью сканирующей электронной микроскопии сфокусируйте электронный луч на поверхность. Платиновый слой рассеивает электроны, предотвращая накопление заряда и сводя к минимуму артефакты изображения.

Детектор улавливает электроны, рассеянные от поверхности, создавая изображение ткани с эпителиальными клетками с микроворсинками.

Для проведения пробоподготовки к СЭМ необходимо перевести только что выделенное сосудистое сплетение в свежеприготовленный фиксир