Одноклеточный Микроинъекция для анализа сотовой связи

Здравствуйте, меня зовут Анаэль. Я работаю в Фонде Освальдо Круза в Лаборатории сотовой связи. Здесь мы изучаем Р2-рецепторы и gap-инъекцию в контексте иммунной системы и печени.

Сегодня я представлю вам микроинъекцию клетки. Инъекции разрыва играют некоторые физиологические роли, такие как передача синапсов, сердечные сокращения и другие. Для этой техники мы можем изучить, являются ли инъекции с разрывом функциональными или нет.

Хорошо, давайте посмотрим на базовые компоненты настройки микровпрыска. Здесь у нас есть инвертированный флуоресцентный микроскоп, в котором мы видим клетки. Это ПЗС-камера для записи результатов.

У нас есть генератор тока, с помощью которого мы будем вводить краситель в клетку. Далее у нас есть держатель, куда подключается микроэлектрод. И микроманипулятор, который подключен к держателю и позволяет перемещать микроэлектрод по трем осям: Z, Y и X. Прежде чем начать эксперимент, мы должны изготовить микроэлектрод.

Мы используем этот капилляр из боросиликатного стекла и это оборудование, которое называется полярным. Сюда же прикрепляем боросиликатный капилляр. Эту вольфрамовую нить мы будем нагревать, чтобы сделать два микроэлектрода.

Теперь нагрев вольфрамовой нити и волна здесь мы потянем вниз, чтобы сделать два микроэлектрода. Лёгкий. Первым делом мы заполняем микроэлектрод красителем. Один из советов здесь заключается в том, что для проведения эксперимента вам нужно заполнить только наконечник несколькими микролитрами.

Не обязательно заполнять все подряд. Примечание с более подробной информацией. Заполните только кончик.

Приступим к эксперименту. У нас есть клетки в чашке Петри, в растворе натрия. Серебряный провод подключается к генератору тока.

Теперь нам нужно прикрепить микроэлектроды к головному столу. Здесь, в головном каскаде, у нас есть еще один серебряный провод, также подключенный к генератору тока. После того, как микроэлектрод прикреплен, мы можем поместить его внутрь ванны.

Обратите внимание, что кончик пипетки осторожно касается ванны. Эту процедуру следует производить очень аккуратно, чтобы избежать разбиения кончика о дно чашки Петри. Оказавшись внутри ванны, мы можем подойти к микроскопу, чтобы найти тень от микропипетки.

Рекомендуем начать смотреть в линзу увеличения. Когда мы находим тень пипетки, мы можем переместить микроэлектрод к клетке с помощью микроманипулятора. Как только он окажется очень близко к ячейке, мы можем провести тестовый пост, чтобы проверить, не заблокирован ли микроэлектрод.

Что мы увидим дальше. Здесь мы видим микропипетку и подгоняем микропипетку очень близко к ячейке. Мы можем видеть движение клеток вправо и влево.

Затем переходим на фильтр, флуоресцентный фильтр. Мы можем применить гиперполяризующий импульс, чтобы проверить, не заблокирован ли кончик пипетки. Поскольку микропипетка находится внутри клетки, мы можем подать гиперполяризующий импульс для загрузки клетки красителем.

Здесь мы используем рассыпчатый свободный желтый краситель. После загрузки клетки красителем, если соседние клетки соединены с помощью щелевых инъекций, мы ждем несколько минут, и мы увидим, как соседние клетки светлеют за счет диффузии красителя этими щелевыми инъекциями. В нашем эксперименте мы видим пять ячеек, отмеченных звездами, демонстрирующих флуоресценцию.

Вот хороший пример эксперимента по микроинъекции в эпителиальные клетки тимуса, в А и B.In на рисунках С и D, показан микроинъекция в инертную клетку тимуса рыхлого свободного желтого цвета и другой краситель, не проницаемый для зазора инъекции, показанный во вкладыше. На рисунке E и F линия эпителиальных клеток тимуса микроинъекционная свободная желтая и во вставку рыхлого свободного желтого цвета и зазор инъекционного блока. Результаты показывают, что свободный желтый цвет не распространился на соседние клетки.

Далее мы видим микроинъекцию в эпителиальные клетки тимуса, в присутствии дексаметазона и количественного определения в B. Дексаметазон увеличивает степень связанности, как показано на рисунке B. Из 100 инъекций количество трех или четырех соединенных клеток было более частым в присутствии этого препарата. Я надеюсь, что смогу помочь новичкам в изучении этой важной техники сотовой связи. Спасибо и до свидания.