Мышиные Трансплантация роговицы: Модель по изучению наиболее распространенная форма твердого трансплантации органов

Общая цель данной процедуры заключается в том, чтобы представить модель острого отторжения аллотрансплантата роговицы. Это достигается путем предварительного удаления донорской роговицы. Следующими этапами процедуры являются подготовка ложа для трансплантата реципиента и наложение швов на донорскую роговицу.

Затем проверяется целостность трансплантата, и если подтеков нет, веко закрывается. Через неделю оценивают помутнение роговичного трансплантата для измерения отторжения аллотрансплантата. В конечном счете, модель может быть использована, может быть проверена различными терапевтическими стратегиями для определения наиболее важных факторов, связанных с отторжением аллотрансплантата при трансплантации солидных органов.

Трансплантация роговицы является наиболее распространенной в Соединенных Штатах. Для этой процедуры доступно несколько животных моделей, но чаще всего используются мыши. Эта модель была использована для определения факторов, включающих как отторжение, так и принятие трансплантата роговицы.

После обезболивания мышей-донора и реципиента и подтверждения их обезболивающего состояния ущипью пальца ноги нанесите чистую смазочную мазь на глаза, не подвергающиеся хирургическому вмешательству. Затем закрепите голову с донорским глазом горизонтально на прочной подвижной опоре с помощью полоски ленты поперек шеи. Теперь с помощью зубца диаметром два миллиметра, кончик которого был окрашен метиловым синим, наметьте центральное место трансплантата роговицы.

Затем с помощью лезвия офтальмологического ножа с углом наклона 15 градусов проникните в роговицу, чтобы избежать повреждения основного хрусталика. Введите вязкоэластичный раствор в переднюю камеру, чтобы камера стала глубже. Теперь иссеките донорский трансплантат ножницами «Венеция» и перенесите трансплантат в чашку с HBSS на льду до использования для достижения мадреса, введите пару капель 1%tpic aide и 2,5% эфрина гидрохлорида в глаз реципиента.

Затем с помощью 1,5-миллиметрового зуба очертите место трансплантата, как описано ранее, с помощью лезвия офтальмологического ножа с углом наклона 15 градусов, проникните в роговицу и введите вязкоэластичный раствор в переднюю камеру для ее углубления. Чтобы сохранить пространство между донорской роговицей и хрусталиком, это снижает вероятность повреждения нижележащего хрусталика и донорского эндотелия. Ножницами «Венеция» снимите очерченную центральную пуговицу роговицы с получателя и выбросьте.

Добавьте вязкоэластичную среду в область, освободившуюся путем удаления роговичной пуговицы, чтобы защитить эндотелиальные клетки роговицы от повреждения при прямом контакте с хрусталиком. Теперь поместите донорскую роговицу над ложем трансплантата с помощью микрощипцов с очень тонким наконечником. Поместите первый укус нейлонового шва 11,0 на донорскую сторону через донорскую роговицу примерно на 90% от полной толщины.

Затем на реципиентную сторону на ту же глубину, затем перевяжите. Продолжайте закреплять пересаженную роговицу с помощью средних кардинальных прерывистых швов. В общей сложности от восьми до 10 швов - это все, что нужно.

Теперь реформируйте и промойте переднюю камеру с помощью инъекции физиологического раствора. В качестве альтернативы введите воздух в переднюю камеру, чтобы реформировать ее. После инъекции аккуратно проверьте целостность трансплантата с помощью целлюлозной губки.

Наконец, оцените глаз. Определите, округлил ли зрачок и выглядит ли передняя камера нормальной. Если трансплантат выглядит хорошо, нанесите мазь с антибиотиком и по желанию закройте веко с помощью бегущего шелкового шва 7,0 после операции.

Наблюдайте за мышью до тех пор, пока она полностью не придет в себя, а затем продолжайте наблюдать за ней в домашней клетке в течение двух дней. Снимите швы с мыши, находящейся под наркозом, в период от четырех до семи дней после операции. После снятия швов понаблюдайте за мышью в течение нескольких дней.

Используя шкалу непрозрачности, оцените каждую роговицу с оценкой от нуля до пяти. Ноль указывает на отсутствие непрозрачности. Оценка единица соответствует минимальной поверхностной непрозрачности.

Оценка от двух баллов указывает на слабое или глубокое помутнение с различимым нижележащим зрачком. А радужная оболочка – знак от трех баллов до роговицы со стромальным помутнением, при котором радужная оболочка не видна в деталях, за исключением краев зрачка. Если имеется плотное помутнение стромы и не видно подлежащих структур, дайте трансплантату четыре балла.

Если, если имеется полное помутнение при интенсивном стромальном отеке и оба зрачка и радужная оболочка полностью затемнены, то оцените трансплантат на пять. Текстовый протокол также предполагает шкалу от нуля до восьми для инфильтрации кровеносных сосудов. С помощью модели прививки можно произвести самые разнообразные манипуляции.

Например, клетки селезенки могут быть добавлены в переднюю камеру от донорской мыши. После того, как донор будет усыплен, удалите селезенку и перенесите ее на клеточное ситечко с помощью трехмиллилитрового шприца-поршня, нарушите работу селезенки, затем промойте клетки селезенки в 10 миллилитрах HBSS, повторно суспендируйте промытые клетки в 10 миллилитрах HBSS и подсчитайте клетки гемоцитометром. Держите клетки при комнатной температуре до тех пор, пока они не будут использованы позже.

Перед проведением трансплантации роговицы введите клетки в переднюю камеру контралатерального глаза с помощью диссекционного микроскопа, введите 1 миллион клеток селезенки в пять микролитров HBSS с помощью иглы 33 калибра. Модель была использована для проверки того, может ли системная толерантность аллоантигена Т-клеток к аллоантигенам, экспрессируемым донорским аллотрансплантатом, улучшить выживаемость трансплантата. Мышам с РМК давали алло-антигены C 57 black 10 путем инъекции клеток селезенки B 10 в переднюю камеру.

Это не улучшило приживаемость аллотрансплантата роговицы. Исследования показывают, что установление антиген-специфической толерантности к аллоантигену, измеренной с помощью ответов DTH, не влияет на исход кожных или роговичных аллотрансплантатов. Аналогичное исследование показало, что когда у мышей с BAB c была установлена толерантность к алло-антигенам B10, кожный трансплантат, щадящий некоторые или все алло-антигены B10, не увеличивал выживаемость.

Таким образом, кишечник С с установленным антиген-специфическим DTH не получил заметной пользы от аллотрансплантатов роговицы или кожи. Как видно из сегодняшнего эксперимента, трансплантация роговицы является технически сложной процедурой. Тем не менее, это лучшая модель для изучения ячеек и факторов, определяющих успех или неудачу графика.