Синегнойная палочка Индуцированные легких травм Модель

Общая цель этой процедуры – имитировать пневмонию, состояние повреждения легких у мышей путем введения аэрогенной псевдомонады. Это достигается путем предварительного приготовления псевдомонады в соответствующей концентрации для инъекций. На втором этапе трахея мыши осторожно обнажается, а затем бактерии вводятся в легкие путем внутритрахеального введения.

На заключительном этапе тщательно отслеживается прогрессирование заболевания у мышей. В конечном счете, воспаление легких, гибель клеток, изменения в альвеолярном барьере и восстановление легких могут быть изучены в мышином легком, введенном с помощью псевдомонады аэрогена. Применение этого метода распространяется на терапию острого повреждения легких, вызванного пневмонией.

Поскольку данная модель имитирует процессы, следующие за пневмонией Для создания кватов p Aerogen, PA 1 0 3 Для установки начинают с транспортировки криопробирки с бактериями от минус 80 градусов Цельсия, хранения до уровня биобезопасности два или BSL две лаборатории в стеллаже в коробке, выстланной 70% этанолом смоченными бумажными полотенцами. Затем под полосой BSL с двумя капотами, P aerogen PA 1 0 3 колонии бактерий на агаровых пластинах из овечьей крови и выращивают колонии в инкубаторе при температуре 37 градусов Цельсия. Примерно через 15 часов используйте бактериальную петлю, чтобы перевести колонии в пять миллилитров PBS.

Затем последовательно разбавляйте бактерии в большем количестве PBS до одного к 10, до четырех, от одного до 10 до семи концентраций, разбавляйте на агаровых тарелках свежей овечьей крови. Затем, примерно через 15 часов инкубации, рассчитайте колониеобразующие единицы для каждой пластины, чтобы определить концентрацию бактерий. Далее Eloqua нанесите соответствующее количество бактерий в 0,5 миллилитра PBS на 1,5 миллилитра, стерилизуйте крио-флаконы с завинчивающейся крышкой, а затем поместите флаконы, запечатанные в крио-флаконах, на полотенце, начиненные дезинфицирующим средством, бумажные полотенца с защелкой крышки коробки в боксе BSL с двумя шкафами, аккуратно прикройте глаза животного мазью вето, работающей.

Быстро сбрейте разрез и очистите кожу с помощью чередующихся трех тампонов спирта и повидон-йода и подтвердите седативный эффект пальцами ног. Ущипнуть, удержать мышь на хирургической доске после обработки кожи местным анестетиком. Затем сделайте небольшой пятимиллиметровый разрез по средней линии шеи животного и с помощью тупых щипцов аккуратно переместите мышцу для доступа к трахее.

Когда трахея будет обнажена, наберите до 1 раза 10 до пяти колониеобразующих единиц бактерий в 20-30 микролитрах PBS в одноразовый шприц объемом 1 миллилитр, оснащенный иглой 27 калибра. Затем введите иглу в трахею и медленно вводите раствор. Следите за тем, чтобы животное задыхалось, что обычно указывает на то, что раствор достиг легкого.

Теперь асептически закройте рану шестью стерильными швами с нулевым монофиламентом и введите послеоперационную анальгезию. Затем выбросьте шприцы и иглы в соответствующий контейнер для биологически опасных острых предметов после того, как каждое животное было введено. Как поодиночке содержатся майерсы в чистых клетках в теплой среде?

Проверяйте животных каждые 30 минут, пока они не придут в сознание и не начнут двигаться. Обработайте хирургические инструменты дезинфицирующим средством из диоксида хлора в течение 15 минут. Затем промойте и верните инструменты в лабораторию для дальнейшей стерилизации по мере необходимости.

Размещайте мышей в помещении BSL для двух животных на протяжении всего эксперимента, а затем после обескровливания под анестезией собирайте легочную ткань у каждого животного под двойным капюшоном BSL. Наконец, если требуется дальнейшая обработка, перевезите образцы в герметичных пробирках, размещенных на штативе на бумажных полотенцах, наполненных дезинфицирующими средствами, в коробке с защелкивающейся крышкой в соответствующее производственное помещение. В этом репрезентативном эксперименте через 24-72 часа после введения P-аэрогена можно наблюдать повышенную клеточность в срезах легких.

К 96 часам легкое начинает восстанавливаться, а к семи дням нормальная морфология альвеол в значительной степени восстанавливается. Туннельное окрашивание срезов легких, подготовленное через 24 часа после установки P-аэрогена, показало гибель клеток альвеол для изучения процесса восстановления. При этой травме модель BRDU может быть введена мышам через три дня после введения p-аэрогена.

Как показано, животные, получавшие p-аэроген, демонстрируют гиперпролиферацию в легочной ткани по сравнению с контрольными животными. Для изучения изменений барьера, проницаемости и воспаления после травмы бронхоальвеолярный лаваж или кишечная жидкость могут быть собраны в разные моменты времени. После впрыскивания аэрогена, например, концентрация белка в кишечнике значительно увеличивается через 48 часов после установки бактерий, что указывает на негерметичность эпителиального барьера и количество клеток.

В это время кишечник также значительно увеличен, что указывает на воспалительную реакцию через четыре-пять дней после введения P-аэрогена, уровень белка в кишечнике и количество клеток начинают снижаться, что свидетельствует о выздоровлении. Кроме того, уровень макрофагального воспалительного белка 2, цитокина, участвующего в притяжении нейтрофилов, значительно увеличивается через 48 часов, а затем возвращается к базальному уровню через 96 часов. При лизатах легких без р-аэрогена в кишечной жидкости наблюдается лишь небольшое количество моноцитов.

Напротив, в кишечнике присутствует большое количество нейтрофилов, выделенных через 48 часов после инъекции. Через 96 часов клеточный состав кишечника возвращается к контрольному уровню после этой процедуры. Другие методы, такие как гистологический, секционный анализ или сбор бронхоальвеолярного лаважа, могут быть выполнены, чтобы ответить на дополнительные вопросы, такие как: какие клетки или факторы участвуют в воспалении и восстановлении после острого повреждения легких?