Одновременное Электрофизиологические Запись и Micro-инъекции агенты, ингибирующие в мозге грызунов

Здесь мы создаем стеклянную пипетку с двойными функциями: ингибирование глубоких структур мозга с помощью микроинъекций лекарств и мониторинг их эффектов в реальном времени с помощью одновременных электрофизиологических записей.

Общая цель этой процедуры заключается в создании доступной инъекционной дороги для микроинъекции нейротрансмиттеров в верхний колликулус крысы при одновременном мониторинге активности нейронов в нескольких единицах. Это достигается путем создания стеклянной пипетки с использованием стеклянного капилляра и вертикального съемника микропипетки. Вторым шагом является вставка серебряной проволоки в капилляр с отрезком проволоки, выступающим из неконического конца.

Далее с помощью клея создается плотное прилегание между стеклянной пипеткой и иглой для подкожных инъекций. Заключительные шаги заключаются в заполнении пипетки раствором ГАМК цвета «Чикаго» небесно-голубого цвета, прикрепленным к микрошприцу, наполненному минеральным маслом и прикрепленному к микроинжектору. В конечном счете, эта конструкция инъекции с доступными и недорогими частями может быть использована для инактивации глубоких структур мозга при одновременной регистрации нейронной активности инактивированной области до, во время и после инъекции препарата.

Есть несколько преимуществ этого метода по сравнению с другими существующими методами, такими как импульсы давления на основе газа и системы впрыска с фотическим впрыском. Один из них заключается в том, что это экономически эффективный метод, который позволяет осуществлять функциональный контроль над доставкой лекарств, что ограничивает повреждение тканей, вызванное чрезмерным введением лекарств. Еще одним преимуществом этой системы является возможность комбинированной записи, которая позволяет эффективно контролировать временную составляющую нейронной деактивации.

Чтобы подготовить записывающие инъекционные пипетки, сначала потяните семисантиметровый капилляр с внешним диаметром в один миллиметр для вертикальной модели полицейского. Семерка 20 или аналогичная единица. Установите нагреватель на 18, а соленоид на один, надев перчатки, вручную сломайте наконечник, чтобы сделать отверстие, и проверьте под микроскопом, что внутренний диаметр составляет от 30 до 40 микрометров.

Измерьте это с помощью линейки видоискателя. Он будет производить относительно низкое сопротивление от 0,3 до 0,6 мегаом. Затем с неконического конца вставьте в пипетку серебряную проволоку длиной около семи сантиметров и оставьте один-два сантиметра свисающим из пипетки.

Согните эту лишнюю проволоку ортогонально капилляру. Далее возьмите иглу для подкожных инъекций 30 калибра и нанесите на вал гибкий пластичный клей. Затем медленно введите иглу в пипетку.

Насколько это возможно. Добавьте еще клея, чтобы создать уплотнение в месте соединения между пипеткой и иглой. Кончиком пипетки вверх дайте сборке высохнуть в течение примерно 12 часов.

После обезболивания и помещения крысы в стереотаксическую рамку, нанесите офтальмологическую мазь, побрейте ее голову начисто. После применения местного анестетика и подтверждения хирургической плоскости анестезии приступайте к надрезу волосистой части головы по срединной полосе с использованием лезвия скальпеля номер 10. При этом обнажаются коронарные и сагиттальные швы.

Затем с помощью хирургического шпателя определите анатомические референсы лямбда и bgma. Отрегулируйте положение головы так, чтобы эти ориентиры находились на одном уровне в одной горизонтальной плоскости. Затем ноль, тонкая жесткая указка, похожая на стеклянную трубку на bgma.

Затем отрегулируйте положение трубки в интересующем вас месте, используя координаты из bgma. С помощью шарпи нарисуйте квадрат вокруг целевой области для трепанации черепа. Теперь с помощью хирургической стерилизованной бормашины медленно удалите кость по отметинам.

Начните с использования как можно меньшего давления и продолжайте двигать сверло, чтобы избежать повреждения тканей головки из-за трения, когда кость стала тонкой, осторожно удалите квадратный участок пинцетом. Дора MA не нужно удалять, так как инъекция проникнет в нее в дальнейшем. Орошайте открытую кору головного мозга спинномозговой жидкостью.

Приготовьте инъекцию путем предварительного наполнения минерального маслом шприца объемом от пяти до 10 микролитров. Далее приготовьте интересующее лекарственное средство с красителем в физиологическом растворе. Здесь 0,5% чикагской небесной голубизны смешивается с 300 микромолярной гамк.

Теперь наполните пипетку для инъекций, сначала загрузив приготовленным раствором шприц объемом в один миллилитр, а затем с помощью шприца загрузите пипетку. При извлечении шприца поддерживайте легкое давление на поршень, чтобы вакуум не удалял раствор с пути инъекции. Проверьте наличие утечки жидкости в возможных местах утечки.

Промокните лишнюю жидкость и еще раз проверьте ее на герметичность. Теперь прикрепите микрошприц с минеральным маслом к инъекционной дорожке. Затем сотрите излишки раствора.

С помощью марли. Проверьте наконечник для инъекции. Через него должна быть возможность пропускать через него небольшие капли раствора, иначе он блокируется или теперь надежно закрепить инжектор в микронасосной системе.

Затем переместите положение инжекционной дороги в целевые координаты и опустите электрод в верхний колус, который может быть идентифицирован путем регистрации визуальных вызванных потенциалов. Пока электрод опущен, приложите небольшое положительное давление, применяя низкую скорость впрыска, чтобы избежать засорения. Прервите инъекцию, когда структура будет достигнута.

После введения инъекции накройте обнаженную кору теплым агаром для предотвращения высыхания. После окончательной установки электрода подождите 30 минут, чтобы обеспечить стабилизацию тканей, окружающих электрод. Затем вводите от 400 до 800 нанолитров раствора со скоростью 40 нанолитров в минуту до активации нейронной активности в верхнем колюсе, электрод должен показать уменьшение спайков во время инъекции ингибирующего раствора.

Визуально вызванные потенциалы были получены в верхнем колусе. После 300-миллисекундной вспышки в контралатеральный глаз после инъекции гамк, спайковая активность в ответ на вспышку подавлялась на 45-60 минут. Во время этой процедуры важно проверить наличие утечек во время загрузки и убедиться, что раствор лекарственного препарата свободно протекает через наконечник для инъекции.