Оптический контроль нейронального белка с использованием генетически кодируемой искусственную аминокислоту в нейронах

Общая цель этой процедуры заключается в оптическом контроле функции нейронного белка с помощью генетически кодируемой, неестественной аминокислоты в нейронах. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы о вкладе конкретного нейронного белка в передачу сигналов нейронов в функции мозга с пространственным временным разрешением. Основное преимущество этой методики заключается в том, что она может быть применена к различным нейронным белкам для достижения оптической регуляции различных нейронных процессов.

Начните эту процедуру с нанесения нейронов гиппокампа на покровные листы в 24-луночном планшете с 500 микролитрами питательной среды после фильтрации через нейлоновую сетку толщиной 40 микрометров. После этого инкубируйте культуру нейронов при температуре 35 градусов Цельсия в инкубаторе, содержащем 5 процентов углекислого газа и 95 процентов увлажненного воздухом, в течение 2-3 недель. В день трансфекции внесите свежий 2,5 молярный раствор хлорида кальция в дважды дистиллированную воду, и стерильно отфильтруйте его фильтром 0,22 мкм.