Эффективная и высокая Метод Выход для выделения мышиных дендритных клеток подмножествах

Общей целью данного протокола является разработка высокоэффективного и высокопродуктивного метода генерации дендритных клеток или ДК, которые судьбоносно отражают их фенотипическую и функциональную дивергенцию in vivo. Дендритные клетки существуют в виде больших популяций в лимфоидных органах. Поэтому мы используем фильтрующий лиганд для увеличения частоты этих важных клеток в донорских тканях, чтобы облегчить эту изоляцию.

Основное преимущество этого метода заключается в том, что он исключает генерацию всех подмножеств DC в подходящих для анализа количествах с использованием только коммерчески доступных агентов. Чтобы получить flt-3 лиганд, экспрессирующий клетки меланомы B16 из 90% конфлюентной культуры, сначала промойте клетки PBS и инкубируйте культуру с 05% трипсином при 37 градусах Цельсия. Через 5 минут погасите активность протеазы 20 миллилитров 4 градусов Цельсия и отделите слой адгезивной модели клетки легким постукиванием и аккуратным пипетированием.