Поведенческий и сетевой фармакологический анализ традиционной монгольской медицины Зади-5 на крысиной модели депрессии

Терапевтическая эффективность Zadi-5 в лечении депрессии может быть установлена с помощью поведенческих тестов, в то время как сетевая фармакология может предсказать потенциальные механизмы, лежащие в основе его эффективности. Сетевая фармакология может помочь в изучении традиционных лекарственных средств, которые демонстрируют сложные механизмы действия, и еще больше минимизировать время и затраты, необходимые для исследования. Такие тесты, как тест открытого поля, тест на потребление сахарозы и водный лабиринт Морриса, являются золотым стандартом для оценки аппетита, уровня мотивации, способности к обучению и памяти на животных моделях неврологических расстройств.

Эти тесты являются простыми, объективными и разумными методами оценки. Создание модели на животных имеет решающее значение для понимания патологических механизмов и эффектов нового лекарства в исследовании депрессивного расстройства. Чтобы создать хорошую модель депрессии, исследователи должны правильно упорядочить и скорректировать интенсивность стимулов.

Для начала примените выбранные стимулы депрессии в сочетании с изоляцией в течение 28 дней ко всем крысам, кроме контрольной, и выращивайте крыс в индивидуальных клетках. Чтобы выполнить тест открытого поля, разделите черный ящик на девять квадратных областей равной площади. Оснастите бокс системой анализа видеослежения.

Через сутки после последнего зонда поместите крысу в центральный квадрат и записывайте ее горизонтальную и вертикальную активность в течение трех минут. Затем подсчитайте количество перечеркнутых квадратов со всеми паузами как горизонтальное упражнение, а стояние и груминг — как вертикальное упражнение. После каждого теста очищайте коробку 75%-ным спиртом, чтобы удалить запах крысы для последующих тестов.

Затем проведите тест на потребление сахарозы, взвесив соответствующие бутылки до и после употребления. И рассчитайте 60-минутную норму предпочтения сахарозы в нулевый, седьмой, 14-й, 21-й и 28-й дни, используя это уравнение. Чтобы выполнить тест водного лабиринта Морриса, разделите бассейн на четыре квадранта.

Расположите квадранты от одного до четырех, а скрытую платформу разместите в третьем квадранте, на один сантиметр ниже поверхности воды. Добавьте молоко в бассейн для некоторого уровня непрозрачности. Затем поместите испытуемого-крысу в лабиринт в разных квадрантах, чтобы он искал платформу в течение 120 секунд.

И записывайте время задержки с помощью системы анализа видеоследов Morris Water Maze. Поместите крысу в фиксированное положение в бассейне. Если субъект не может найти скрытую платформу в течение 120 секунд, запишите задержку как 120 секунд.

Затем снимите платформу, поместите крысу в воду и запишите количество пересечений зоны в течение 120 секунд. Просмотрите веб-страницу фармакологии системы традиционной китайской медицины и введите семена семени myristicae, корни al-glandia-radiks и piperis longi fructus в раздел названий трав, чтобы получить названия химических веществ. Установите фармакокинетический индекс пероральной биодоступности (OB) более 30%, а лекарственный индекс — более 0,18.

Выполните поиск активных компонентов в фармакопее китайской медицины, чтобы определить химические названия каждого компонента. Затем выполните поиск по идентифицированным химическим названиям в Pub Chem, чтобы найти изомерные улыбки или чернила. Идентификация белков-мишеней активных компонентов с помощью предсказания SEA, Batman и швейцарской мишени с изомерными улыбками или чернилами и поиск перекрывающихся белков.

Скопируйте данные в файл Excel. Затем выполните поиск и определите потенциальные белковые мишени для депрессии, используя ключевые слова «депрессия» и «депрессивное расстройство» в GeneCards, DisGeNET и DrugBank. Скопируйте данные в файл Excel.

Просмотрите диаграмму Венна и загрузите мишени депрессии в первый список. Затем загрузите мишени для активных компонентов Zadi-5 во втором списке и отправьте. Получите диаграмму Венна и отфильтруйте перекрывающиеся целевые кандидаты.

Создайте электронную таблицу, которая называется сетью. Также создайте электронную таблицу, называемую type. Экспортируйте лист в Cytoscape, чтобы построить сеть, Zadi-5 herbs ingredients disease.

Установите общие целевые объекты в строковой базе данных для анализа их взаимодействий. Установите тип белка как homosapiens. Установите значение порога взаимодействия равным 0,9, чтобы выбрать только экспериментально проверенные типы и не отображать узлы одиноких островов.

Откройте инструмент DAVID и вставьте 86 потенциальных антидепрессантов-мишеней Zadi-5 в стартовую скобку анализа, чтобы изучить соответствующие сигнальные пути. Загрузите документ о пути к бочонку. Выберите гены в пути PI3k-AKT из анализа обогащения и вставьте их в электронную таблицу, чтобы создать тип и сетевой документ.

Экспортируйте тип сетевого документа в Cytoscape, чтобы создать сеть визуализированных составных целевых путей PI3K-AKT. Исследуемая группа животных не показала существенных различий до хронического непрогнозируемого легкого стресса или стимуляции CUMS. После создания модели CUMS вертикальные и горизонтальные баллы группы были ниже, чем в контрольной группе.

По сравнению с модельной группой, вертикальные и горизонтальные баллы в контрольной группе с положительным результатом и в группе Зади-5 были достоверно выше. На нулевой день у испытуемых групп не было существенной разницы в потреблении сахарозы. На 28-й день группы Zadi-5 и контрольная группа с положительным результатом были выше, чем в модельной группе.

В водном лабиринте Морриса задержка группы моделей для поиска платформы была значительно выше по сравнению с контрольной группой. Латентность в контрольной и Зади-5 группах была ниже, чем в модельной группе. Что касается количества пересечений зон, то модельная группа показала меньшее количество пересечений, чем контрольная группа.

В контрольной группах и группе Zadi-5 было выявлено больше скрещиваний, чем в модельной группе. Анализ диаграммы Венна выявил 86 перекрывающихся мишеней Zadi-5 из 1000 белковых мишеней, связанных с депрессией. На основании этих данных были построены мишени для лечения заболеваний ингредиентов трав Зади-5 и анализ сети белок-белкового взаимодействия кандидатов в мишени.

Согласно анализу пути KEG, сигнальный путь PI3K-AKT занял седьмое место. Он был связан со многими сигнальными путями. Соответственно, путь PI3K-AKT считался относительно более важным, чем другие пути обогащения.

Во время этой процедуры очень важно воздерживаться от повторения одного и того же типа стимулов в течение нескольких дней подряд. После анализа компонентов Zadi-5 в онлайн-базах данных качество валидации может быть обеспечено жидкостной хроматографией, масс-спектрометрией и спектроскопией ядерного магнитного резонанса.