Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

15.9: DNA İzolasyonu

JoVE Core
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. You will only be able to see the first 20 seconds.

Education
DNA İzolasyonu
 

15.9: DNA İzolasyonu

Hücrelerden alınan DNA, moleküler klonlama gibi birçok biyoteknoloji ve araştırma uygulaması için gereklidir. Hücrelerden DNA çıkarmak ve arındırmak için, araştırmacılar DNA çıkarma çeşitli yöntemler kullanın. Farklı protokollerin özellikleri farklılık gösterse de, bazı genel kavramlar DNA çıkarma işleminin temelini atarken.

Süreç

İlk olarak, hücrelerin lysed gerekir-açık kırık-çözelti içine DNA serbest bırakmak için. Hücreler, hücreleri kırmak için güç kullanan veya öğüten homogenizer, sonicator veya boncuk çırpıcı gibi ekipmanlar kullanılarak fiziksel olarak lizise edilebilir. Genellikle, deterjan gibi maddeler kimyasal lipid bazlı hücre zarlarını bozmak için lysis sırasında eklenir-çekirdek ve hücre den DNA serbest yardımcı. Bir santrifüj deki iplik hücre enkazını dibe kadar geriler ve hücresel malzemeler içeren lysat daha fazla işlem için toplanır.

DNA daha sonra RNA ve proteinler gibi diğer hücresel moleküllerden ayrılmalıdır. Bu nedenle, RNa ve Proteinaz K gibi enzimler genellikle sırasıyla RNA ve proteinleri düşürmek için lysis sırasında veya sonrasında eklenir. Ayrıca, fenol ve kloroform gibi organik çözücüler genellikle protein DNA ayırmak için kullanılır. Tipik olarak, örnek fenol-kloroform ile girdap ve daha sonra tüp sulu ve organik aşamaları ayırmak için santrifüj. Üst kısmında DNA içeren sulu faz daha sonra organik fazda protein geride bırakarak, kapalı borulu olabilir.

Tuzlar genellikle DNA ayıklama sırasında DNA stabilize etmek ve çözelti dışında çökelti yardımcı eklenir. DNA yağış standart bir yöntem, etanol veya isopropanol gibi buz gibi alkol eklemektir, örnek. Bu, DNA'nın tüpteki sıvının içinde beyaz, bulutlu bir çökelti oluşturmasına neden olur.

Örnek daha sonra bir santrifüj içinde bükülmüş, DNA çökelti bir pelet olarak tüpün altında toplamak için neden. Pelet sıvı çıkarılarak yıkanır, alkolde yıkanır ve tekrar döndürülerek yıkanır. Son yıkamadan sonra, pelet bir tampon içinde yeniden askıya alınır-biyoteknoloji de incelenmeye veya kullanılmaya hazır saflaştırılmış DNA'nın sulu bir çözeltisi oluşturur.

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter