慢性的微型驱动器阵列在体内录音：四极大会

Summary

在这个协议中，我们将演示如何制造和使用同一个微驱动器阵列，这是在大鼠慢性电生理记录设计条件四极管。此外，我们说明了微驱动器阵列的建设，其中包括安装接地线和保护锥的最后阶段。

Abstract

四极，捆绑四个电极，已被证明是一个有价值的工具，同时记录多个神经元在体内。差分幅度超过四极通道动作电位签名允许单机活动多单元信号的隔离。能够精确地控制脑立体定位的位置和四极管的深度，研究整个大脑区域的协调的神经活动的关键。在与一个微驱动器阵列相结合，这是可以实现精确定位和稳定的控制在几天或几周的过程中，许多四极管。在这个协议中，我们演示了如何制造和使用的基本工具和材料条件四极管，安装到一个长期的多驱动器的四极管阵列的四极管的录音，在大鼠，接地线连接的微型驱动器阵列，并在体内到的微驱动器阵列一个附加的保护为了保护环境与身体接触的四极管锥。

Protocol

1。制备四极管

1. 首先获得一个50厘米长的一个四极建设，聚酰亚胺绝缘，镍铬丝与一个直径为12.5微米的核心。折了一半的线。沿对你的手指，使它们粘在一起。确保对电线在其整个长度有良好的接触。
2. 对折，再由两端。确保一端形成的循环是不扭结。切使四个秘诀是一致的四个线对非循环结束。
3. 对于下一步，您将需要修改的鳄鱼夹，电动翻转装置，单杠和一个以上的转动设备。鳄鱼夹修改粘合塑料酒吧剪辑基地。凡接触线提示，钳四线，连同修改后的鳄鱼夹。挂在单杠的电线回路。将鳄鱼夹到机动阶段。
4. 应用80顺时针40计数器的时钟明智的曲折钢丝捆扎在约三分钟的过程中遵循的曲折。这些参数可以根据自己的需要是多种多样的。
5. 四极扭完成后，保险丝的电线加热热风枪（420 ° C或790 ° F）从三个不同角度，用中低流量。对于每一个角度，开始1-2厘米以下的电线束分裂，运行热枪放下，电线约5秒钟，以2厘米的距离。使用谨慎，因为高温会完全融化的绝缘，导致短路。
6. 现在的电线都融合在一起，取出轻轻提起鳄鱼夹，以纾缓紧张的四极的四极管，从捻线设备，并切断四极附近的鳄鱼夹。在另一端，切断回路，有四个非保税股导线长度相等。
7. 接下来，用软尖镊子轻轻弯曲的电线分开顶部的个人股。
8. 四极管是现在准备装载到微型驱动器阵列。 21日至25日四极管和存储在无尘框，直到它的四极加载过程的时间。

2。装入四极管和接地线的微型驱动器阵列

1. 若要继续，您将需要一个完整的微型驱动器阵列。如果你还没有建，是指“慢性体内录音的微型驱动器阵列：驱动器制造”的视频在我们的设计方案，四极管会附着在一端连接器的硬件，将贯穿于聚酰亚胺在微驱动器等，电极提示以下的微型驱动器阵列的基础延长运营商管。
2. 在开始之前，建立一个驱动器支架上，一端可以连接到连接器板，并在另一端，可以通过一个panavise夹住。在这个例子中，驱动器支架上粘一个X - ACTO刀柄（图1c）的一端磨最大的连接器。
3. 与软尖镊子的四极，并使用一个立体，推入四极尖，聚酰亚胺载体管的微型驱动器之一。推入管的四极，直到个人的电极导线在驱动器阵列的顶部靠近连接器板。小心不扭结或弯曲的线，因为这将导致四极管在垂直角度，而不是进入大脑，并会削弱四极管的完整性。
4. 在电极板界面，使用软尖镊子轻轻送入各自的孔的四根导线的另一端​​。再次，避免扭曲或弯曲的电线。四线全部到位，推到他们的一双钳子，缩短下颌孔黄金引脚。当推入孔引脚，他们将剥离导线绝缘层，并创建一个电气连接。
5. 以供日后参考，微型驱动器和针电极上的接口板的位置之间的映射的轨道。
6. 继续加载共有18个四极管。其余三个微阵列上的驱动器将用于房子的参比电极。每个参比电极是由一个四极管，只使用一个四无粘结线两端。要附加的参比电极，遵循的加载过程，但只有四个电极中的一个附加到相应的参考电极针连接器上的板。
7. 如果您计划多现场录音，它可能是值得的，计划从四极管连接器板提前的连接。这应尽量减少在实验过程中调整了错误的四极的可能性。
8. 四极装载完成后，两个接地线，一个动物保护锥之一。切一个6英尺长的绝缘钢丝（文字：直径0.005“），并删除3毫米的绝缘，使用金属镊子，从每个线端。再切4“长期绝缘钢丝（文字：直径0.005”）。删除的一端和另一端的1厘米3毫米的绝缘。
9. 路线上的微型驱动器阵列的方孔，通过对接口板6“地线。在指定的地洞里的黄金引脚，裸露的电线连接电极接口板。此线将连接到该动物的头骨。
10. 路线4'以前安装的接地线接地线平行。连接电极接口板，使用在另一个指定的地洞黄金针剥离3毫米年底。这根线，稍后将连接到一个保护锥，这将作为一个小的法拉第笼法，以减少噪声拾取。我们现在已经完成了连接线，可以继续完善我们的四极管。

3。设置四极管的长度

1. 在这个过程中，我们的目标是切断所有的四极管，使他们略长的目标大脑结构的深度。在我们的例子中，设计的微型驱动器的最大行程为5-6毫米，足以达成许多新皮层区和成年大鼠背海马。首先，降低所有最大限度地暴露，使四极管微驱动器。同时切断所有四极管比期望的最终使用了一双锋利的罚款剪刀的长度较长，约5毫米的长度。
2. 晋级决赛，在panavise准备一双锯齿剪刀。夹一个很小的角度下，锯齿朝上一个句柄，而留下的其他处理晃来晃去。
3. 现在已经完全撤回到他们的引导套管转动的微驱动器的所有的四极管。
4. 使用一个立体，全面扩展了一个四极管及其套管。用一把尺子，位置锯齿剪刀，在指导导管所需的距离。慢慢地，轻轻地切断与一个平稳的运动四极。这四极管已被切断后，撤回的微型驱动器3 - 4mm的。每个四极重复这个过程，直到所有被切断。在这一点上，你准备镀金。

4。镀金四极管和质量检查

镀金的镍铬合金四极线是长期稳定录音的关键。它可以防止腐蚀和提高生物相容性。

1. 安装在外部模式的阻抗米和直流电流发生器，音频输出（图1d）的检查模式。四极管内每个通道的六个可能对触摸的两根导线的电流发生器，使用音频反馈，以确定是否短裤对之间存在。如果存在短，重新再次减少锯齿剪刀和测试四极。如果问题仍然存在，丢弃的四极，取代它。
2. 当没有短裤存在于所有的四极管，将所有的微驱动器，尽量尽可能将所有的四极管。
3. 检查电极阻抗（图1e），修改设备配置。现在所有的四极管浸提示浴成一个标准的镀金解决方案。黄金浴电气连接阻抗计的积极的主导作用。检查通过触摸负阻抗计导致相应引脚连接器板电极的阻抗。
4. 测量和记录每个线对微驱动器阵列的阻抗。正常值范围从1-3兆欧。
5. 电流发生器，设置1-3之间μA的电流。下一步，牢固地附着在负极引线的阻抗计针连接器上的板。放入电镀配置的设备（图1F）。阻抗表上，迅速从正常模式切换，旁路模式，和背部。在旁路模式时，电流将通过四极管和黄金的解决方案，以及金将被镀上电极尖端。每一轮电镀后的阻抗应比以前少。重复的电流脉冲，如果阻抗不低于1兆欧。一个保守的范围内可接受的阻抗是250kOhm 350欧姆。如果低于200欧姆的阻抗下降，这可能表明短路。
6. 如果经过反复的脉冲的阻抗不降充分，可能会阻碍电极尖端。重剪的四极，短裤，检查和重复镀金的过程。如果不利于重切削，更换了四极管，并重新启动。
7. 电镀后的所有四极管，DIP简要地的四极提示，在乙醇中，并让他们干3〜5分钟。
8. 暴露在空气中的四极提示，四极管电流发生器内的短路测试。如果存在两个或两个以上的一个四极电极之间的直流连接，再削减黄金四极管，板。
9. 所有的四极管镀金完成后，添加一个中等厚度的氰基丙烯酸酯胶下降，每个tetrod之间的接口E及其聚酰亚胺管。这将确保它的微型驱动器的四极，并保持四极管的长度。
10. 作为最后一步，移动到驱动器所有的四极管，通过打开所有螺丝。

5。附加的保护锥

保护锥的目的是为了免受环境的微驱动器和暴露的四极线。它还提供了一个实验期间处理的支持，并减少电噪声。我们使用一个3 - D印刷塑料锥（参考第一部分：驱动器制造）。但是，它有可能使圆锥体像一个弯曲苏打片可以从其他材料。

1. 以塑料锥，并修正了一些内部或外部表面铝箔胶带。
2. 接下来，通过锥钻一个小孔（直径1.5毫米）和松散地连接到一个螺丝钉，垫圈和螺母内锥。这将作为接地线的电器通过。我们建议使用0-80大小的螺钉和垫圈组合。
3. 首先，插入和部分变成圆锥体两侧的3个1-72大小的螺丝（长度在3 / 16英寸）。悬浮与驱动器阵列，在驱动器中插入锥。确保两个接地线从驱动器阵列的底部扩展。周围环绕的1-72螺丝几次之一4地线裸露部分，并紧紧地拧紧螺钉。圆锥体的安全驱动器基地，通过收紧其余两个锥形螺丝。
4. 最后，以1厘米剥离短的地线之间的铝箔胶带和垫圈，螺丝缭绕。拧紧螺丝固定地面。现在我们有一个最后准备手术植入的微型驱动器阵列。

6。代表性的成果

1. 微驱动器阵列的生产，现已完成。你的微驱动器阵列装有18个四极管和3个参考通道。它是包裹在保护锥和耐久性第。 20克25g以内，平均完成的微驱动器阵列，带保护锥的重量。
2. 使用标准的外科手术植入完成的驱动器阵列。正如你可以看到，驱动器连接到前置放大器芯片和成捆的电线进行信号的数据采集硬件和软件。

图1：一个四极扭曲配置）示意图。一个单杠暂停上述自动化的四极扭装置的四极无粘结电极导线 B）四极阻抗测量电极电镀安装。检查短路时，电路不同的是：黑线连接的连接器板到另一个电极通道C）自定义一个近距离的微驱动器阵列持有人的工具。圆棒是一个X - ACTO刀柄。连接器是26针，双列，轧机最大的连接器。两件粘合在一起，使用牙科丙烯酸D）配置短检查。通道X和通道Y是四四极通道的任何两个不同的渠道。，五）测量电极阻抗的配置。电流源是“关闭”。阻抗计是“上”和“测试”。F）的黄金镀电极提示配置。电流源设置为'on'，音频为“ON”，模式是“单极”，直流测试为“ON”，目前设置为2微安。

Discussion

该协议是两部分协议的第二批：“微阵列的驱动器，用于慢性在体内录制。”相结合的微驱动器阵列和四极是获得一个清醒的许多神经元的同步录音功能强大的工具，表现动物准备。希望，我们已经提供了所有必要的信息，你会需要开始在自己的实验室或改进的电生理记录。

机动四极捻线设备定制的设计和制造。我们提供了一个供应商和部分的数量，将允许您要订购的具有类似功能的设备。另外，电动翻转装置可在内部构造，只需通过结合一个磁化的搅拌棒，​​连接到鳄鱼夹的机动旋转条形磁铁，这个配置最有可能需要手动旋转，手动旋转方向逆转计数，手动启动/停止。

一些电极接口板没有连接电极丝针和孔机制。相反，你可能获得一个接口板，金属引脚扩展连接器板等金属针是标准的电子元件往往发现那些类似。我们简述金属针连接四极通道的方法。首先，删除提示每四极的四个电极导线绝缘。这是通过尽可能简要使用的手持丁烷火炬的火焰，每个电极的尖端。获得收缩包装，将适合容易在金属针，并会挤压针紧紧收缩包装已加热后。切割金属针的长度收缩膜油管。使用毛细管作用，以填补银粉漆的收缩包装。插入一个电极丝的收缩包装露出一角。轻轻滑动在金属引脚电极丝之间的针和墙上的收缩包装收缩包装。其余三个四极电极渠道重复这些步骤。最后，用热风枪的一侧到另一侧的议案，热四个引脚覆盖收缩膜收缩包装内的电极导线。此时，你应该有稳定和可靠的连接之间的四极和连接器板。

纵观这些加工程序小心处理电极导线需要很少的力量是损害。四极管和微驱动器阵列的过程中有许多步骤，每一步都是一样获得高质量的数据，其他的关键。这里所描述的协议运作良好，我们的实验室考虑现有设备。在自己的实验室资源可能有所不同，因此，可以考虑每一步仔细，不要犹豫，要改变协议，以满足自己的要求和约束，以达到最佳性能。

Materials

Name	Type	Company	Catalog Number	Comments
Panavise	Tool	Panavise	Model 301	Holds either micro-drive array or serrated scissors
Modified Xcelite 378M Pliers	Tool	Newark Inc	96F8903	For inserting connector board pins. To make, remove 2mm from one tip of the pliers.
Slow Cure Glue	Material	Great Planes (Champaign, IL)	GPMR6015	To glue the tetrode to the micro-drive
Gold Plating Solution	Material	Neuralynx Inc.	Sifco Selectron Gold NC	Contains gold particles for electroplating
Current Generator	Tool	World Precision Instruments, Inc.	A365D-B	A.K.A. Stimulus Isolator. Used to electroplate gold solution onto electrode tips.
Impedance Meter	Tool	BAK Electronics	IMP-1 / 6662 / 2788	To check impedance of electrodes
Hot Air Gun	Tool	Steinel (Germany)	HG 3002 LCD	To fuse electrodes together to make tetrode
Accu-Tek Carbofib Tip Tweezers	Tool	Aven	18768 (Pattern 304)	For handling tetrodes
Alligator Clip	Tool	Fine Science Tools	18050-35	A.K.A. Bulldog serrefine. To clip the tetrodes together during twisting
Micro Dissecting Scissors	Tool	Biomedical Research Instruments	25-1000	For general cutting of tetrode/electrode wire
Iris Toughcut Serrated Scissors	Tool	Fine Science Tools	14058-09	For final cut of tetrodes
Teflon Coated Stainless Steel Wire	Material	A-M Systems	790500	Ground wire
12.5 micron nichrome wire	Material	Kanthal Palm Coast	Rediohm-800 1/4 HARD PAC COATING	Polyimide coated micro-wire for making tetrodes.
Tetrode Twister	Tool	Neuralynx Inc.	Tetrode Assembly Station	Increases the speed and consistency of tetrode fabrication.
Silver Paint	Material	GC International	22-023	For connecting the micro-electrode wires of the tetrode to the connector pins (see Discussion)
X-Acto Knife Handle	Material	MSC Direct	X3001	For constructing a micro-drive holding device.
26 Pin, 2 Row Connector	Material	Mill-Max	852-10-026-30-001000	For constructing a micro-drive holding device.