تحقيق الجودة العالية وكمية مناسبة من الجزر الإنسان هي واحدة من أبرز الشروط لنجاح زرع جزيرة. في هذا الفيديو ، ونحن تصف خطوة بخطوة لإجراءات العزل جزيرة البنكرياس الإنسان (الجزء الأول : الهضم ، وجمع من نسيج البنكرياس) باستخدام طريقة تعديل الآلي.
إدارة مرض السكري نوع 1 هو مرهقة ، سواء على الفرد والمجتمع ، وتكلف أكثر من 100 مليار دولار سنويا. على الرغم من الاستخدام الواسع النطاق للرصد الغلوكوز والانسولين صياغات جديدة ، وتطوير العديد من الأفراد لا تزال مضاعفات ثانوية مدمرة. ويمكن زرع البنكرياس جزيرة بالقرب من استعادة السيطرة على مستويات الجلوكوز الطبيعي في مرضى السكري<sup> 1</sup> ، دون التعرض لخطر نوبات سكر الدم الخطيرة التي ترتبط مع العلاج المكثف بالأنسولين. توفير ما يكفي من الكتلة جزيرة المهم للجزيرة زرع ناجحة. ومع ذلك ، سمة من الجهات المانحة ، والمشتريات ، والحفاظ على الجهاز تؤثر على النتيجة عزلة<sup> 2</sup>. في جامعة إلينوي في شيكاغو (UIC) وضعنا بروتوكولا العزلة ناجحة مع التدرج تحسين تنقية<sup> 3</sup>. بدأ البرنامج في يناير 2004 ، وأجريت أكثر من 300 من العزلة حتى نوفمبر 2008. تم إرسال بنكرياسات في حلول الحفاظ الباردة (UW ، جامعة ويسكونسن أو HTK ، الحامض الأميني تريبتوفان كيتوغلوتارات)<sup> 4-7</sup> لخلية مختبر العزل في المحاكم الاسلامية لعزل الجزيرة. وقد تم عزل جزيرات البنكرياس باستخدام الأسلوب UIC ، الذي هو نسخة معدلة من الطريقة الموصوفة في الأصل من قبل Ricordi<em> وآخرون</em><sup> 8</sup>. لفترة وجيزة ، وبعد تنظيف البنكرياس من الأنسجة المحيطة بها ، وكان ذلك مع حل perfused انزيم (Serva كولاجيناز الانزيم + V أو متعادلة البروتياز سيغما). ثم نقل البنكرياس منتفخة إلى غرفة Ricordi الهضم ، متصلة ، أغلقت تعديل نظام التداول الأنابيب ، وارتفعت درجة حرارة تصل إلى 37 درجة مئوية. خلال عملية الهضم ، واهتزت الغرفة بلطف. وقد أخذت عينات باستمرار لرصد التقدم الهضم. مرة واحدة تم الكشف عن الجزر حرة تحت المجهر ، وتوقفت عملية الهضم من خلال تنظيف الباردة (4 درجات مئوية) حل تخفيف RPMI (Mediatech ، هيرندون ، فرجينيا) في نظام التداول لتخفيف الانزيم. بعد أن تم جمعها وغسلها وسائل الاعلام في M199 تستكمل مع الزلال البشري ، وأخذت عينات الأنسجة لتنقية ما قبل العد وحضنت مع الحل UW قبل التنقية. ويمكن وصف عملية تنقية في الجزء الثاني : تنقية الثقافة والجزر الإنسان.
وهناك مجموعة متنوعة من العوامل التي تؤثر على نتائج العزلة 9،10. فيما بينها ، والهضم للانسجة البنكرياس يلعب دورا بارزا. بناء على منطقتنا الإنسان جزيرة تجربة العزلة ، لخص لنا النقاط التالية الحاسمة ، التي يمكن أن تؤثر المحتمل أن تسفر جزيرة والجودة.
<ol style=";text-align:right;directi…بدعم من التمويل من جامعة إلينوي في شيكاغو ، وكذلك جزيرة الخلية مركز موارد منحة المعاهد الوطنية للصحة (RFA – RR 05-003) ، ومؤسسة كريستوفر ، ومؤسسة Efroymson ، ومؤسسة Tellabs.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Ice Slush Machine | equipment | Taylor Company | K4036546 | make sterile ice |
Centrifuge | equipment | Beckman Coulter | 424803 | |
MZ6 Inverted Microscopy TLBD4.1 | equipment | Leica Diagnostic Instrument Co | 4103 | |
Cell Culture Dish with 2 mm Grid | equipment | Nunc Brand Products | 174926 | islet counting |
Digital Water Bath EX7 | equipment | NesLab | 105361058 | |
Thermometer | equipment | IBI:IR | 60444 | |
MonoBloc Balance AB 104-S | equipment | Metler Toledo | 1119430864 | measure pancreas weight |
MasterFlex II Speed Controller | equipment | Cole Parmer Instrument Co | J00006445 | adjust flow speed during degestion |
Digital Sight DS L1 | equipment | Nikon | 217267 | |
Perfusion Unit | equipment | Custom Made/Swiss | n/a | |
Cooler for perfusion unit | equipment | Fisher Scientific | 3013P | |
Ricordi Chamber | equipment | University of Miami | n/a | |
RPMI dilution solution | reagent | Mediatech Inc | 99783024 | |
University of Wisconcin (UW) solution | reagent | DURAMED | 1000-46-06 | |
Hank’s Buffered Salt Solution (HBSS) | reagent | Mediatech Inc | 99-597-CM | |
25% Human Albumin | reagent | GRIFOLS | NDC 61953-0002-2 | |
M199 media (wash solution) | reagent | Mediatech Inc | 99-784-CM | |
Collagenase NB1 GMP grade | reagent | SERVA Electrophoresis | N0002937 | |
Neutral Protease NB1 GMP grade | reagent | SERVA Electrophoresis | N0002936 | |
Betadine | reagent | Cardinal Health | 29906-004 | |
Cefazolin | reagent | West-Ward Pharmaceutical | NDC 0143-9924-90 | |
Dithizone | reagent | Sigma | D5130 |