उच्च गुणवत्ता और मानव islets की उचित मात्रा में हासिल सफल आइलेट प्रत्यारोपण के लिए प्रमुख किसी और चीज की की है. इस वीडियो में, हम कदम से कदम का वर्णन मानव अग्नाशय आइलेट अलगाव के लिए प्रक्रियाओं (भाग मैं: पाचन और अग्नाशय के ऊतकों का संग्रह) एक संशोधित स्वचालित पद्धति का उपयोग कर.
टाइप 1 मधुमेह के प्रबंधन को भारी है, दोनों व्यक्ति और समाज के लिए, 100 से अधिक अरब डॉलर सालाना लागत. ग्लूकोज की निगरानी और नए इंसुलिन योगों के व्यापक उपयोग के बावजूद, कई व्यक्तियों को अभी भी विनाशकारी माध्यमिक जटिलताओं के विकास. अग्नाशय आइलेट प्रत्यारोपण मधुमेह के रोगियों में सामान्य ग्लूकोज नियंत्रण के पास बहाल कर सकते हैं<sup> 1</sup> गंभीर hypoglycemic एपिसोड है कि इंसुलिन गहन चिकित्सा के साथ जुड़े रहे हैं के जोखिम के बिना. पर्याप्त आइलेट जन प्रदान सफल आइलेट प्रत्यारोपण के लिए महत्वपूर्ण है. हालांकि, दाता विशेषता, अंग खरीद और संरक्षण को अलग परिणाम को प्रभावित<sup2></sup>. शिकागो में इलिनोइस विश्वविद्यालय (यूआईसी) पर हम एक बेहतर शुद्धि ढाल के साथ एक सफल अलगाव प्रोटोकॉल विकसित किया है<sup> 3</sup>. कार्यक्रम जनवरी 2004 में शुरू किया था, और 300 से अधिक isolations नवंबर 2008 के लिए प्रदर्शन किया गया. pancreata ठंड संरक्षण समाधान में भेजा गया था (UW, के विस्कॉन्सिन या HTK के विश्वविद्यालय, हिस्टडीन Tryptophan ketoglutarate)<sup4-7></sup> सेल यूआईसी पर अलगाव प्रयोगशाला आइलेट अलगाव के लिए. अग्नाशय islets यूआईसी विधि है, जो मूल रूप से Ricordi द्वारा वर्णित विधि का एक संशोधित संस्करण है का उपयोग कर अलग किया गया<em> एट अल</em><sup8></sup>. संक्षेप में, आसपास के ऊतकों से अग्न्याशय की सफाई के बाद, यह एंजाइम समाधान (Serva Collagenase + तटस्थ Protease या सिग्मा वी एंजाइम) के साथ perfused था. distended अग्न्याशय तो Ricordi पाचन चैम्बर के लिए स्थानांतरित किया गया था, एक संशोधित, बंद संचलन टयूबिंग प्रणाली से जुड़ा है, और 37 सी. सेंटीग्रेड तक गर्म पाचन के दौरान, कक्ष धीरे हिल गया था. नमूने लगातार पाचन प्रगति की निगरानी करने के लिए ले जाया गया. एक बार मुक्त islets खुर्दबीन के नीचे पाया गया है, पाचन ठंड निस्तब्धता से बंद कर दिया गया था (4 डिग्री सेल्सियस) परिसंचरण एंजाइम पतला प्रणाली में RPMI कमजोर पड़ने समाधान (Mediatech, Herndon, VA). बाद एकत्र की है और M199 मानव albumin के साथ पूरक मीडिया में धोया जा रहा है, ऊतक पूर्व शुद्धि गिनती के लिए नमूना था और शुद्धि पहले UW समाधान के साथ incubated. शोधन और मानव islets की संस्कृति: शोधन प्रक्रिया भाग II में वर्णित किया जाएगा.
वहाँ अलगाव 9,10 परिणाम को प्रभावित करने वाले कारकों की एक किस्म हैं. उनमें से, अग्नाशय के ऊतक के पाचन एक प्रमुख भूमिका निभाता है. अपने स्वयं के मानव आइलेट अलगाव अनुभव के आधार पर, हम निम्नलिखित महत्वपूर्ण ब?…
शिकागो में इलिनोइस विश्वविद्यालय के रूप में अच्छी तरह के रूप में आइलेट सेल संसाधन केंद्र NIH अनुदान (RFA-05-003 आर आर), क्रिस्टोफर फाउंडेशन, Efroymson फाउंडेशन, और Tellabs फाउंडेशन से धन के द्वारा समर्थित.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Ice Slush Machine | equipment | Taylor Company | K4036546 | make sterile ice |
Centrifuge | equipment | Beckman Coulter | 424803 | |
MZ6 Inverted Microscopy TLBD4.1 | equipment | Leica Diagnostic Instrument Co | 4103 | |
Cell Culture Dish with 2 mm Grid | equipment | Nunc Brand Products | 174926 | islet counting |
Digital Water Bath EX7 | equipment | NesLab | 105361058 | |
Thermometer | equipment | IBI:IR | 60444 | |
MonoBloc Balance AB 104-S | equipment | Metler Toledo | 1119430864 | measure pancreas weight |
MasterFlex II Speed Controller | equipment | Cole Parmer Instrument Co | J00006445 | adjust flow speed during degestion |
Digital Sight DS L1 | equipment | Nikon | 217267 | |
Perfusion Unit | equipment | Custom Made/Swiss | n/a | |
Cooler for perfusion unit | equipment | Fisher Scientific | 3013P | |
Ricordi Chamber | equipment | University of Miami | n/a | |
RPMI dilution solution | reagent | Mediatech Inc | 99783024 | |
University of Wisconcin (UW) solution | reagent | DURAMED | 1000-46-06 | |
Hank’s Buffered Salt Solution (HBSS) | reagent | Mediatech Inc | 99-597-CM | |
25% Human Albumin | reagent | GRIFOLS | NDC 61953-0002-2 | |
M199 media (wash solution) | reagent | Mediatech Inc | 99-784-CM | |
Collagenase NB1 GMP grade | reagent | SERVA Electrophoresis | N0002937 | |
Neutral Protease NB1 GMP grade | reagent | SERVA Electrophoresis | N0002936 | |
Betadine | reagent | Cardinal Health | 29906-004 | |
Cefazolin | reagent | West-Ward Pharmaceutical | NDC 0143-9924-90 | |
Dithizone | reagent | Sigma | D5130 |