높은 품질과 인간 아일 레츠의 적절한 수량을 달성하는 것은 성공적인 아일릿 이식을 위해 유명 전제 조건 중 하나입니다. 이 비디오에서는, 우리는 단계별로 설명을 인간의 췌장 아일릿 절연을위한 절차 : 수정된 자동화된 방법을 사용하여 (부분 I 소화 및 췌장 조직의 수집).
Abstract
1 형 당뇨병의 관리는 매년 100여 억 달러를 비용, 모두 개인과 사회에, 부담합니다. 포도당 모니터링 및 새로운 인슐린 공법의 광범위한 사용에도 불구하고, 많은 사람은 여전히 파괴적인 보조 합병증을 개발합니다. 췌장 아일릿 이식은 당뇨병 환자에서 정상적인 혈당 조절 근처에 복원할 수 있습니다<sup> 1</sup>, 집중적인 인슐린 요법과 관련된 심각한 혈당 에피소드의 위험이없이. 충분한 아일릿 질량을 제공하는 것은 성공적인 아일릿 이식을 위해 중요합니다. 그러나 기증자 특성, 기관 조달 및 보존은 절연 결과에 영향을<sup> 2</sup>. 시카고 일리노이 대학 (UIC)에서 우리는 개선 정화 기울기와 함께 성공적인 격리 프로토콜을 개발했습니다<sup> 3</sup>. 이 프로그램은 2004 년 1 월 시작, 그리고 300 개 이상의 isolations 11 월 2008까지 수행했다. pancreata는 (UW, 위스콘신 또는 HTK 대학, 히스티딘 – 트립토판 Ketoglutarate) 차가운 보존 솔루션에 보내진<sup> 4-7</sup> 아일릿 절연을위한 UIC에서 셀 절연 연구실 있습니다. 췌장 아일 레츠는 원래 Ricordi에 기술된 방법의 수정된 버전입니다 UIC 방법을 사용하여 격리되었다<em> 외</em><sup> 8</sup>. 간단히, 주변 조직에서 췌장 청소 후에, 그것은 효소 솔루션 (Serva Collagenase + 중성 프로 테아제 또는 시그마 V 효소)와 perfused했습니다. 커지는 췌장은 다음 Ricordi의 소화 챔버로 전학 수정, 폐쇄 순환 튜브 시스템에 연결하고, 37 ° C.까지 예열했다 소화 동안 챔버가 부드럽게 흔들리고되었습니다. 샘플은 소화의 진행 상태를 모니터링하는 연속적으로 촬영했다. 무료 아일 레츠가 현미경으로 발견되었습니다되면, 소화가 추위 플러싱에 의해 중지되었습니다 (4 ° C) 효소를 희석하기 위해 순환 시스템에 RPMI 희석 용액 (Mediatech, 헤른던, VA). 수집과 인간의 알부민과 보충 M199 미디어 씻은 후에, 조직은 미리 정화 개수에 대한 샘플과 정화 전에 UW 솔루션 incubated했다. 인간 아일 레츠의 정화와 문화 : 정제 과정은 부 II에서 설명하는 것입니다.
Protocol
1. 시설 설치 인간 아일릿 절연은 팀웍과 관련된 시간 민감한 절차이며, 따라서, 넷 개인이 절차를 수행하기 위해 필요합니다. 팀은 dissects과 췌장을 cannulates 외과 의사에 의해 리드입니다. 아일릿 절연은 팀이 UIC 아일릿 격리 시설을 입력하는 순간을 시작합니다. 팀 구성원은 필요한 모든 장비는 원심 분리기와 같은 검사입니다 켜져 있는지 확인하십시오. 그들은 또한 모든 후즈과 …
Discussion
절연 결과 9,10 영향을 미치는 다양한 요소가 있습니다. 그 중에서도 췌장 조직의 소화는 현저한 역할을한다. 우리 자신의 인간 아일릿 절연 경험을 바탕으로, 우리는 잠재적으로 아일릿 수율과 품질에 영향을 미칠 수있는 중요한 포인트 아래와 요약.
효소의 종류가 활용되면 소화 시간이 다릅니다.
즉시 완전히 acinar 조직에서 분리 아일 레츠의 40~50%로 소화가 희석 솔루션을 추가?…
Acknowledgements
시카고 일리노이 대학뿐만 아니라 아일릿 세포 자원 센터 NIH 그랜트 (RFA – RR 05-003), 크리스토퍼 재단 Efroymson 재단과 Tellabs 재단에서 기금을 지원.
Qi, M., Barbaro, B., Wang, S., Wang, Y., Hansen, M., Oberholzer, J. Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue. J. Vis. Exp. (27), e1125, doi:10.3791/1125 (2009).