Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Мышей почечная Процедура трансплантации

doi: 10.3791/1150 Published: July 10, 2009

Summary

Трансплантации почки у мышей является технически сложной процедурой, которая требует тщательного послеоперационного ухода и лечения для достижения успеха.

Abstract

Почечная ортотопической трансплантации у мышей является технически сложной процедурой. Хотя первая пересадка почки у мышей были выполнены Рассел и др. Более 30 лет назад (1) и уточнена Чжан и др. лет спустя (2), мало кто в мире освоили данную процедуру. В нашей лаборатории мы успешно выступили 1200 ортотопической трансплантации почки с> 90% выживаемости. Ключевые моменты для успеха включают строгий контроль реперфузионного повреждения, кровотечением и тромбозом, как во время процедуры и после трансплантации, а также использование вместо 10-0 11-0 шва для анастомозов.

Послеоперационный уход и лечение получателя является чрезвычайно важным, чтобы пересадить успеха и оценки. Все реципиентов почечного трансплантата получают антибиотики в виде инъекций пенициллина сразу после трансплантации и sulfatrim в питьевой воде постоянно. Общее состояние животного оценивается ежедневно и весь анализ креатинина крови проводится регулярно с портативными I-СТАТ машины для оценки трансплантата функции.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Доноров органов урожая (2):

  1. Обезболить доноров использованием 65mg/kg пентобарбитал ИС; анестезия поддерживается изофлюрана (2-3%).
  2. Сделать средней линии разрез от грудины до лобка, чтобы войти в донора живот и выставить левую почку путем перемещения кишечника сбоку от правой стороны.
  3. Изолировать левой почки путем лигирования и деления надпочечников и яичек судов 8-0 шелковые нити.
  4. Мобилизация аорты выше ее слияния с почечной артерии и вены.
  5. Мобилизация нижней полой вены (НПВ) выше и ниже ее слияния с почечной артерии и вены.
  6. Лигировать аорты ниже почечных артерий и вен с 8-0 шелковых шва, чтобы минимизировать кровотечение.
  7. Рассеките левого мочеточника от почечной воротах в мочевой пузырь.
  8. Expose ureterovesical узел использованием каудально опровержение на мочевой пузырь куполом.
  9. Акцизный небольшой, эллиптические участок мочевого пузыря содержащие левой ureterovesical соединения, используемые для реконструкции мочевого пузыря с помощью к мочевого пузыря анастомоза. Правого мочеточника не входит в мочевой пузырь.
  10. Лигировать IVC ниже почечных артерий и вен с 8-0 шелковые нити.
  11. Лигировать аорту выше почечной артерии и вены, и медленно заливать трансплантата на месте с 0.2-0,4 мл холодной, гепаринизированной лактата раствор Рингера через инфраренального аорты.
  12. Лигировать IVC выше почечной артерии и вены с 8-0 шелковые нити.
  13. Трансекта почечной вены на ее слияния с IVC.
  14. Разделите аорты наклонно, около 2 мм ниже почечных артерий.
  15. Удаление почки и его кровоснабжения с мочеточника придается пузыря патч целиком. Хранить в лактата раствор Рингера на льду.
  16. Эвтаназии доноров мыши цервикальным сдвигом под наркозом.

Получатель трансплантации (2):

  1. Обезболить получателя с 65 мг / кг фенобарбитала IP и поддерживать наркозом изофлюрана (2-3%).
  2. Сделать средней линии разрез, накрыть кишечника с мокрой марли и тщательно убирать с левой стороны.
  3. Лигировать правого мочеточника, почечная артерия и вена, и удалить правую почку.
  4. Тщательно изолировать и кросс-зажим инфраренального аорты и IVC с двумя 4-мм microvasular зажимы после лигирования поясничной ветви.
  5. Место 10-0 нейлона шов через всю толщину аорты и отказаться сделать эллиптической aortaotomy одним разрезом (примерно одну пятую диаметра сосуда).
  6. Сделайте продольные венотомия, прокалывая IVC с 30 иглы и расширить надлежащим использованием microscissors.
  7. Промывать оба аорты и IVC с гепарином солевой очистить внутрипросветный крови или сгустков.
  8. Удалить донорской почки от льда и поместите его внутри-абдоминально в правый фланг мыши. Донорской почки остается влажным холодным солевым пропитанной марлевым тампоном.
  9. Поместите два швов пребывания в проксимальных и дистальных вершине получателей aortaotomy с манжетой аорты доноров.
  10. Сделать из конца в сторону анастомоза между манжетой доноров аорты и передней стенки aortaotomy получателей, используя 2 ~ 3 непрерывного 10-0 нейлоновые нити во внешнем аорты.
  11. Включите трансплантата донорской почки на левый фланг получателя. повторить предыдущую процедуру между манжетой доноров аорты и задней стенки aortaotomy получателей
  12. Выполните конца в сторону анастомоза между донором почечной вены и задней стенки получателей IVC, используя 4 до 5 непрерывного 10-0 нейлоновые швы с внутренней IVC. , а затем передняя стенка IVC и доноров почечной вены закрыты 4 ~ 5 непрерывного швов снаружи IVC.
  13. Анастомоз как вены и артерии должен быть завершен в течение 20 минут.
  14. Промыть трансплантата с холодным солевым несколько раз в течение анастомоза.
  15. Разделите купол получателя мочевого пузыря, и остановить кровотечение с прижиганием.
  16. Сделайте небольшой надрез на купол.
  17. Поместите два пребывания швов 10-0 нейлона для anastomize доноров небольшой участок мочевого пузыря с купола мочевого пузыря получателей. Каждая сторона анастомоза зашивается с 8 ~ 10 непрерывной швов.
  18. Закрыть живота в два слоя с непрерывной 4-0 стерильные, синтетические рассасывающиеся Викрил шва.
  19. Дайте получателя мышей 0,4 мл теплой солевой во время операции по прерывистой внутривенного введения.

Послеоперационный уход за Получатель

  1. После закрытия брюшной полости, однократной внутримышечной инъекции пенициллина (500U/10g) вводят (2).
  2. Кроме того, получатели получают 0,05 мг / кг внутримышечно бупренорфина на 0 день и 1-й день после операции боль. После операции реципиентов получать воду, содержащую sulfatrim (100mg/kg), пока эксперимент тэrminated.
  3. За первые 24 часа после операции мышей находятся в контролируемой температурой инкубатора.
  4. Мыши обычно выздоравливают от наркоза в течение 1 часа работы и даны обычную пищу и воду без ограничений объявление.
  5. Кожа Швы снимают через 2 недели после операции.

Получатель Нефрэктомия

  1. Обезболить получателя 4 ~ 7 дней после трансплантации почки с 65 мг / кг фенобарбитала ИС; анестезия поддерживается изофлюрана (2-3%).
  2. Открытый живот через срединный разрез.
  3. Обложка кишечника с солевым пропитанной марли и тщательно убирать с правой стороны.
  4. Удалить левой почки после лигирования левого мочеточника, вены почек и сердца.
  5. Закрыть живота в два слоя с непрерывной 4-0 синтетические рассасывающиеся Викрил шва.

Всего Измерения креатинина крови

  1. Еженедельно в две недели для сбора крови менее 0,2 см производится либо submandibularly без анестезии и ретро-орбитально под изофлюрана анестезии.
  2. Количественные целом уровень креатинина крови определяются с помощью I-Stat Портативный Клинические Analyzer (Heska корпорации, Форт-Коллинз, CO).
  3. Условных единицах (мг / дл) превращаются в единицы СИ в мкмоль / л путем умножения условных единиц на 88,4.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Мы провели около 1200 случаев трансплантации почки у мышей с технической скоростью успеха> 90%. По сравнению с пересадке сердца, вероятность успеха трансплантации почки, как правило, низка. Тем не менее, наша лаборатория сохраняет высокий уровень успеха (> 90%) трансплантации почки. Ключевые моменты для достижения успеха являются снижение реперфузия травмы обеих почек доноров и получателей, и свести к минимуму кровотечение и тромбоз в течение всей процедуры, и после операции. Следующие факторы могут быть наиболее важными: (а) уменьшить кровотечение у реципиента во время операции в максимально возможной степени на основе тщательного и нежного эксплуатации; (б) минимизировать теплой ишемических и пережатие раз во время подготовки донора и реципиента почки трансплантации; (с) использовать небольшой участок мочевого пузыря доноров, чтобы предотвратить некроз, недостаточного кровоснабжения и мочевого пузыря утечки после операции; (г) задержки нефрэктомия родного почки до 4 ~ 7 дней после трансплантации, чтобы пересаженной почки для восстановления функции после операции; (е ) выполнять анастомозы (между манжетой доноров аорты и передней стенки, а также между манжетой доноров аорты и задней стенки аорты получателя) вне аорты по сокращению числа случаев тромбоза; (е) вести получателя мышей теплая, по крайней мере для 24 часов после операции, (г) дают антибиотики, чтобы получатель мышей после операции, чтобы предотвратить возможные инфекции.

В этом протоколе, мы используем вместо 10-0 11-0 шов, не затрагивая выживаемость. Хотя 11-0 шов идеально подходит и используется во многих лабораториях трансплантации, мы чувствуем, что 10-0 шов является достаточным для использования в трансплантации почки до тех пор, как факторы, описанные выше, хорошо контролируются.

Удаление оставшейся родной почек необходимо, чтобы снижение почечной функции трансплантата можно контролировать с помощью сыворотки измерения креатинина. Все получатели почек трансплантата почки проходят левого родной почки от 4 до 7 дней после трансплантации почки. Нефрэктомия не выполняется во время трансплантации почки, поскольку получатели характерно страдать плохим здоровьем или не выжить, когда обе процедуры проводятся в то же время. С 4 по 7 день задержки между процедурами разрешения почек трансплантата, чтобы оправиться от травмы ишемии и реперфузии перед родной почка удалена. Функция почек трансплантата оценивают ежедневные осмотры общее состояние здоровья животного и уровня креатинина в крови. Для справки, без пересаженных, нормальные мыши уровня креатинина около 20 мкмоль / л Почечная отказ аллотрансплантата подозревается, когда получатель мыши показывает признаки болезни и уровень креатинина повышается почти до 100 мкмоль / л, при котором время трансплантаты собирают для гистопатологические анализа.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Эксперименты на животных были проведены в соответствии с руководящими принципами и правилами установленными Университета штата Огайо IACUC.

Acknowledgments

Эти исследования были частично поддержана финансирование NIH R01 AI36532 в Гах. Мы хотели бы отметить отличную поддержку в пересадке патологии при условии, доктор Тибор Nadasdy и бесценным руководством и дальновидность предоставляемые покойный д-р Чарльз Г. Орос в инициировании этого исследования усилий.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
i-STAT Other HESKA Cat 5101
i-STAT Cartridge Other HESKA CAT 5110-CREA
Sulfatrim Other Actavis R02109
Isoflurane Other NOVAPLUS CA-0474
10-0 Suture Surgery Sharpoint AK0100

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Russell, P. S., Chase, C. M., Colvin, R. B., Plate, J. M. D. Kidney transplants in mice. An analysis of the immune status of mice bearing long-term, H-2 incompatible transplants. JExpMed. 147, 1449-1468 (1978).
  2. Zhang, Z., Schlachta, C., Duff, J., Stiller, C., Grant, D., Zhong, R. Improved techniques for kidney transplantation in mice. Microsurgery. 16, (2), 103-109 (1995).
Мышей почечная Процедура трансплантации
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Wang, J., Hockenheimer, S., Bickerstaff, A. A., Hadley, G. A. Murine Renal Transplantation Procedure. J. Vis. Exp. (29), e1150, doi:10.3791/1150 (2009).More

Wang, J., Hockenheimer, S., Bickerstaff, A. A., Hadley, G. A. Murine Renal Transplantation Procedure. J. Vis. Exp. (29), e1150, doi:10.3791/1150 (2009).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter