Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Murine נוהל השתלת כליה

doi: 10.3791/1150 Published: July 10, 2009

Summary

השתלת כליה בעכברים היא הליך מאתגר מבחינה טכנית זה דורש טיפול זהיר שלאחר הניתוח והטיפול להצלחה.

Abstract

השתלת הכליה בעכברים orthotopic היא הליך מאתגר מבחינה טכנית. למרות השתלת כליה הראשון עכברים בוצעו על ידי ראסל ואח' מעל 30 שנה (1) ומעודן ידי ז'אנג ואח' שנים מאוחר יותר (2), כמה אנשים בעולם שולטים על הליך זה. במעבדה שלנו אנחנו ביצעו בהצלחה 1200 השתלות כליה orthotopic עם שיעור> הישרדות 90%. נקודות המפתח להצלחה כוללים שליטה קפדנית של דימום פציעה, reperfusion ופקקת, הן במהלך ההליך שלאחר ההשתלה, ושימוש 10-0 במקום 11-0 תפר עבור anastomoses.

לאחר הניתוח וטיפול של הנמען חשוב מאוד השתלת הצלחה והערכה. כל מקבלי השתלת כליה לקבל אנטיביוטיקה בצורה של הזרקה של פניצילין מיד לאחר השתלת ו sulfatrim במי השתייה הרף. לבריאות בעלי חיים בסך מוערך מדי יום שלם קריאטינין מנתח הדם מבוצעות באופן שגרתי עם מכשיר I-STAT ניידים להערכת תפקוד השתל.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

תורמים איברים קציר (2):

  1. הרדימי התורם באמצעות IP 65mg/kg pentobarbital; הרדמה מתוחזק על ידי Isoflurane (2-3%).
  2. ביצוע חתך קו האמצע מעצם החזה אל חיק להיכנס לבטן התורם ולחשוף את הכליה השמאלית ידי הזזת המעי רוחבית לצד ימין.
  3. לבודד את הכליה השמאלית ידי ligating וחלוקת כלי יותרת הכליה ועל האשכים עם תפר 8-0 משי.
  4. לגייס את אבי העורקים מעל צומת עם העורק עורק הכליה.
  5. לגייס את נחות הווריד הנבוב (IVC) מעל ומתחת לצומת עם העורק עורק הכליה.
  6. ולקשור אבי העורקים מתחת העורק עורק הכליה עם תפר 8-0 משי כדי למזער את הדימום.
  7. מנתחים את השופכן השמאלי hilum מן הכליה אל שלפוחית ​​השתן.
  8. לחשוף את צומת ureterovesical באמצעות הכחשה caudad על הכיפה שלפוחית ​​השתן.
  9. והבלו תיקון קטן, אליפטי של שלפוחית ​​המכילה את צומת ureterovesical שמאל, המשמש לשיקום השתן באמצעות השקה שלפוחית ​​השתן אל שלפוחית ​​השתן. השופכן הימני אינו כלול עם שלפוחית ​​השתן.
  10. ולקשור IVC להלן העורק עורק הכליה עם תפר 8-0 משי.
  11. ולקשור אבי העורקים מעל עורק וריד כליות, ולאט לאט perfuse השתל באתרו עם קור 0.2-0.4ml, heparinized פתרון לקטט רינגר דרך האאורטה infrarenal.
  12. ולקשור IVC מעל עורק וריד כליות עם תפר 8-0 משי.
  13. Transect את הווריד כליות בצומת שלה עם IVC.
  14. מחלקים את אבי העורקים בעקיפין, כ 2 מ"מ מתחת העורק הכלייתי.
  15. הסר את הכליות ואת אספקת הדם שלה עם השופכן מצורף התיקון שלפוחית ​​השתן כמקשה אחת. חנות בפתרון לקטט רינגר על הקרח.
  16. להרדים את העכבר על ידי התורם נקע בצוואר הרחם בהרדמה.

נמען השתלה (2):

  1. להרדים את הנמען עם IP מ"ג / ק"ג 65 pentobarbital ולשמור על ההרדמה על ידי Isoflurane (2-3%).
  2. ביצוע חתך קו האמצע, לכסות את המעי עם גזה רטוב ובזהירות לסגת אותו בצד שמאל.
  3. ולקשור השופכן הימני, עורק וריד כליות, ולהסיר את הכליה הימנית.
  4. בזהירות לבודד צולבות מהדק אבי העורקים infrarenal ו-IVC עם שני 4 מ"מ מהדק microvasular לאחר ligating הענפים המותני.
  5. מניחים תפר 10-0 ניילון דרך עובי מלא של אבי העורקים ואת לסגת לעשות aortaotomy אליפטי על ידי חתך בודד (כחמישית בקוטר של כלי).
  6. הפוך venotomy האורך ידי פירסינג IVC עם מחט 30 מד ולהרחיב כראוי באמצעות microscissors.
  7. להשקות גם את אבי העורקים ו-IVC עם מלוחים heparinized כדי לנקות דם intraluminal או קרישי דם.
  8. הסר את כליה מתורם מן הקרח ולמקם אותו תוך בטן ב באגף הימני של העכבר. כליה התורם נשמרת לחות עם כרית ספוג מלוחים קר גזה.
  9. מניחים שתי התפרים להישאר בפסגת הפרוקסימלית ומ דיסטלי של aortaotomy הנמענים עם השרוול התורמים אבי העורקים.
  10. תן השקה מקצה השרוול בצד בין התורם אבי העורקים ואת הקיר הקדמי של aortaotomy הנמענים, באמצעות 2 ~ 3 רצוף 10-0 התפרים ניילון בחלקה החיצוני של האאורטה.
  11. סובבו את כליה מתורם השתל אל האגף השמאלי של הנמען. לחזור על התהליך הקודם בין השרוול התורם אבי העורקים ואת הקיר האחורי של aortaotomy הנמענים
  12. ביצוע השקה end-to-הצד בין הווריד תורם הכליה לבין הקיר האחורי של מקבלי IVC, באמצעות 4-5 רצוף 10-0 התפרים ניילון בפנים של IVC. ואז הקיר הקדמי של הווריד IVC ותורמים כליות סגורים עם 4 ~ 5 תפרים רציפה מחוץ IVC.
  13. השקה של וריד וגם עורק חייב להסתיים בתוך 20 דקות.
  14. שוטפים את השתל עם קר מלוחים מספר פעמים במהלך השקה.
  15. מחלקים את הכיפה של שלפוחית ​​השתן הנמען לעצור את הדימום עם כויה.
  16. ביצוע חתך קטן על הכיפה.
  17. מניחים שתי התפרים נשארים של ניילון 10-0 כדי anastomize התיקון תורמים שלפוחית ​​השתן קטן עם כיפה הנמענים שלפוחית ​​השתן. כל צד של השקה היא sutured עם 8 ~ 10 תפרים רציפה.
  18. סגור את הבטן בשתי שכבות עם תפר מתמשך 4-0 סטרילי סינתטיים, vicryl נספגים.
  19. תן עכברים הנמען מלוחים חמים 0.4ml במהלך הניתוח לסירוגין על ידי הזרקה IV.

לאחר הניתוח טיפול של נמען

  1. לאחר סגירת הבטן, זריקה תוך שרירית בודדת של פניצילין (500U/10g) מנוהלת (2).
  2. בנוסף, מקבלי לקבל 0.05 מ"ג / ק"ג לתוך שריר עצירות על 0 יום 1 יום לאחר ניתוח לכאב. בעקבות ניתוח, השתלת לקבל מים המכילים sulfatrim (100mg/kg) עד הניסוי היא terminated.
  3. במשך 24 שעות לאחר הניתוח הראשון עכברים נשמרים בטמפרטורה מבוקרת חממה.
  4. עכברים בדרך כלל להתאושש מן ההרדמה תוך שעה 1 של המבצע ומקבלים מזון רגיל כרצונך מים.
  5. התפרים יוסרו עור 2 שבועות לאחר הניתוח.

נמען Nephrectomy

  1. להרדים 4 הנמען ~ 7 ימים שלאחר השתלת כליה עם 65 מ"ג / ק"ג IP pentobarbital; הרדמה מתוחזק על ידי Isoflurane (2-3%).
  2. פתח את הבטן דרך חתך קו האמצע.
  3. מכסים את המעיים עם גזה מלוחים ספוג ובזהירות לסגת אותו לצד ימין.
  4. הסר את הכליה השמאלית לאחר ligating השופכן השמאלי, כליות וריד בעורק.
  5. סגור את הבטן בשתי שכבות עם תפר רציף סינתטי 4-0 vicryl נספגים.

שלמות וקראטינין מדידות

  1. בשבוע איסוף דם סמ"ק דו שבועי של פחות מ 0.2 מבוצעת ללא הרדמה או submandibularly או רטרו orbitally בהרדמה Isoflurane.
  2. כמותי כל קריאטינין בדם נקבעים באמצעות Analyzer אני-Stat Portable קלינית (Heska קורפ, בפורט קולינס, CO).
  3. יחידות קונבנציונלי (mg / dl) מומרים יחידות SI של mmol / L על ידי הכפלת יחידות קונבנציונלי על ידי 88.4.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

ביצענו כ 1200 מקרים של השתלת הכליה בעכברים עם שיעור הצלחה טכנית של 90%>. לעומת השתלת לב, את שיעור ההצלחה של השתלת כליה הוא נמוך בדרך כלל. עם זאת, במעבדה שלנו שמרה על שיעור הצלחה גבוה (> 90%) של השתלת כליה. נקודות המפתח להצלחה הן כדי להפחית פציעות reperfusion לכליה הן התורמות ומקבלי, ולמזער את הדימום פקקת בכל הליך שלאחר הניתוח. הגורמים הבאים עשויים להיות החשובים ביותר: (א) להפחית דימום הנמען במהלך הניתוח ככל האפשר באמצעות ניתוח זהיר ועדין, (ב) לצמצם פעמים איסכמי ו צולבות מתהדקות חם במהלך הכנת תורם כליה להשתלה הנמען (ג) השימוש תורם קטן בשלפוחית ​​תיקון למנוע, נמק לספק די דם דליפת השתן לאחר הניתוח (ד) nephrectomy עיכוב של הכליה יליד עד 4 ~ 7 ימים לאחר ההשתלה, כדי לאפשר את הכליה שהושתלו להתאושש לתפקד לאחר הניתוח, (ה ) לבצע anastomoses (בין השרוול התורם אבי העורקים ואת הקיר הקדמי ובין השרוול התורם אבי העורקים ואת הקיר האחורי של אבי העורקים של הנמען) מחוץ האאורטה להפחית את ההיארעות של פקקת; (ו) לשמור על עכברים הנמען חם לפחות 24 שעות לאחר הניתוח: (ז) לתת אנטיביוטיקה עכברים הנמען שלאחר הניתוח, כדי למנוע זיהומים אפשריים.

בפרוטוקול זה, אנו משתמשים 10-0 במקום 11-0 תפר מבלי להשפיע על שיעור ההישרדות. למרות תפר 11-0 אידיאלי בשימוש במעבדות רבות להשתלה, אנו חשים כי 10-0 תפר מספיקה לשימוש השתלת כליה כל עוד הגורמים שתוארו לעיל נשלטות היטב.

הסרת הכליה יליד שנותר הוא חיוני כדי ירידה בתפקוד הכליות שתל יכול להיות פיקוח על ידי מדידות קריאטינין בסרום. כל מקבלי השתל כליה לעבור nephrectomy של הכליה השמאלית יליד בין 4 ל 7 ימים השתלת כליה פוסט. Nephrectomy לא מתבצע בזמן השתלת כליה כי מקבלי אופיינית סובלים בריאות לקויה או לא לשרוד כאשר שני ההליכים מתנהלים בו זמנית. בפיגור 4-7 יום בין הליכי ההיתרים שתל כליה כדי להתאושש מפציעה איסכמיה ו reperfusion לפני יליד מוסר כליות. שתל בתפקוד הכליות נבחנת על ידי בדיקות יום של בריאות בעלי חיים הכוללת קריאטינין בדם. לקבלת הפניה, שאינו המושתלים, עכבר נורמלי יש רמה קריאטינין של כ 20 mmol / L. דחייה allograft כליות חשוד כאשר העכבר מקבל מראה סימנים של מחלה ורמת קריאטינין גבוהות ליד 100 mmol / L שבו שתלי זמן נקצרים עבור ניתוחים histopathological.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות והתקנות שנקבעו על ידי אוניברסיטת מדינת אוהיו IACUC.

Acknowledgments

מחקרים אלה היו נתמך בחלקו על ידי מימון על ידי NIH R01 AI36532 אל השדים. ברצוננו להודות תמיכה מצטיינים השתלת הפתולוגיה מסופק על ידי ד"ר טיבור Nadasdy, ועל הדרכה הנולד יסולא בפז ו המסופקים על ידי המנוח ד"ר צ'רלס ג'Orosz בייזום זה מאמץ המחקר.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
i-STAT Other HESKA Cat 5101
i-STAT Cartridge Other HESKA CAT 5110-CREA
Sulfatrim Other Actavis R02109
Isoflurane Other NOVAPLUS CA-0474
10-0 Suture Surgery Sharpoint AK0100

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Russell, P. S., Chase, C. M., Colvin, R. B., Plate, J. M. D. Kidney transplants in mice. An analysis of the immune status of mice bearing long-term, H-2 incompatible transplants. JExpMed. 147, 1449-1468 (1978).
  2. Zhang, Z., Schlachta, C., Duff, J., Stiller, C., Grant, D., Zhong, R. Improved techniques for kidney transplantation in mice. Microsurgery. 16, (2), 103-109 (1995).
Murine נוהל השתלת כליה
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Wang, J., Hockenheimer, S., Bickerstaff, A. A., Hadley, G. A. Murine Renal Transplantation Procedure. J. Vis. Exp. (29), e1150, doi:10.3791/1150 (2009).More

Wang, J., Hockenheimer, S., Bickerstaff, A. A., Hadley, G. A. Murine Renal Transplantation Procedure. J. Vis. Exp. (29), e1150, doi:10.3791/1150 (2009).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter