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Medicine

主动脉原位移植大鼠模型,研究慢性血管病变的发展

doi: 10.3791/1989 Published: December 4, 2010

Summary

本视频演示了一个简单的模型来研究在大鼠体内的移植血管病变(TVP)的发展主动脉原位移植模型。

Abstract

慢性排斥反应的研究模型是必不可少的调查期间移植血管病变(TVP)的发展的病理生物学和病理生理过程。

心血管慢性排斥反应的研究中常用的动物模型是在啮齿类实验动物进行异位心脏移植模型。这种模式是在实验中广泛使用,因为小野和Lindsey(3)发表了他们的的技术。要分析的结果,在血管,心,切片,所有船只都必须测量。

调查心血管questionings慢性排斥反应的另一种方法是主动脉移植模型(1,2)。主动脉主动脉原位移植模型,可以很容易地组织评估(2)。 PVG -预报模式是CAV的研究特别有用,因为急性血管性排斥反应的主要混杂因素和环孢素A(CsA)治疗并不妨碍CAV的发展,我们在临床上发现类似(4 )。 A7天的环孢素A的时期,是需要在此模型中,以防止急性排斥反应,并实现长期生存与发展的TVP。

这种模式也可以用来研究急性细胞排斥反应和异种模型(5)媒体坏死。

Protocol

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查尔斯河(Sandhofer WEG 7,D - 97633 Sulzfeld)均购自大鼠,体重约250 - 300G。
使用PVG大鼠作为捐助者,和作为接受者的ACI大鼠移植手术。

老鼠被安置在常规条件下,美联储标准大鼠议员和水广告libidum。

所有手术器械消毒后才能使用。

捐助者的准备:

与异氟醚麻醉大鼠(2,5-3%)使用感应室。

  1. 剃须的腹部和胸部的头发和地方大鼠在它的后面,并置于它的鼻子和嘴口罩,以保持麻醉。
  2. 消毒腹部和胸部区域广泛使用普罗沃碘,下次使用80%乙醇,重复此步骤三次。
  3. 检查捏后脚要确保足够anesthesized大鼠的反射。
  4. 抽血,通过开放的腹部和腹主动脉切成一个洞的老鼠。
  5. 小心打开胸腔,发现胸降主动脉。
  6. 解剖胸主动脉周围组织如脂肪,神经和食管。
  7. 撤回主动脉1.5厘米一块使用couter,未经组织损伤的主动脉。
  8. 灌注主动脉移植冷无菌生理盐水彻底的移植,并存储在4 ° C。

收件人:

与异氟醚麻醉大鼠(2,5-3%)使用感应室。在手术过程中保持体温。

  1. 剃须腹部和应用眼膏,以防止在麻醉过程中干燥的眼睛。
  2. 将大鼠在它的后面,并置于它的鼻子和嘴口罩,以保持麻醉。
  3. 使用普罗沃碘,下次使用80%乙醇,重复此步骤三次消毒腹部。
  4. 检查捏后脚要确保足够anesthesized大鼠的反射。
  5. 执行中线腹部切口,分离两个步骤的皮肤和肌肉,打开腹部。
  6. 放置在一个温暖的生理盐水滋润无粉手套的肠子。折叠的肠子周围的手套,以防止水分流失。
  7. 取出的脂肪组织覆盖腹主动脉。
  8. 解剖主动脉形成下腹地区分叉,注意不要造成损害血管的分支。
  9. 如果必要的主动脉结扎分支。
  10. 首先使用显微解剖主动脉肾部分钳,阻止血液的流动。
  11. 下一步,放置第二钳接近主动脉分叉处。
  12. 现在,血流停止,删除短段的主动脉。
  13. 体主动脉瓣移植,在冰上一直保持在0.9%无菌生理盐水,缩短到足够的长度和位置的差距。
  14. 连接到收件人主动脉捐助主动脉,执行运行缝线使用8-0普理灵缝合(爱惜康,日本东京,德国)。开始与颅结束对端吻合。
  15. 当远端吻合完成后,小心地打开远端钳​​。
  16. 如果没有出血远端钳开放后,小心地打开颅钳。缝合出血的情况下,再次关闭钳,找到出血,并使用一个单针止血。
  17. 应当有一个可见的脉冲在远端的主动脉。
  18. 下一步行动的肠子放回腹部。
  19. 与预热的无菌生理盐水冲洗腹部。
  20. 关闭的墙壁用6-0普理灵运行缝线(爱惜康,日本东京,德国)的腹部肌肉层。
  21. 使用5-0普理灵(爱惜康,日本东京,德国),运行缝合关闭皮肤。
  22. 虽然仍然是在麻醉大鼠,注入皮下4-5mg/kg卡洛芬。
  23. 要为这种类型的程序提供足够的镇痛,安乃近添加到饮用水疼痛用药3天移植后(50毫克每100毫升安乃近)。

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Discussion

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由于一些原因,我们发现主动脉原位移植模型,更准确的方式来探讨异位心脏移植模型相比,TVP发展:
主动脉移植模型的手术技术方面,体现的是一种方便可行的方法,只需要在月底到年底,吻合的成就,而异位心脏移植模型可能被视为一个更加复杂和容易出错的外科医生的技能挑战,需要在两个主要血管端至端侧吻合。

组织学标本的分析和测量大幅促进移植血管病变的可能,因为在一个唯一的定义,而不是众多小心脏血管,呈现出规模和宪法浩大的品种,这可能差点获得客观的调查勘探的直径单船检查可靠的结果。收件人的胸主动脉可能作为正常对照组,提供了一个直径和形态的外观比较简单而可靠的的对象,而在异位心脏移植模型,它是难以比拟的近郊或心肌的血管,一个伟大的个体间变异的基本。

除了这些发现,主动脉瓣移植不容易产生破坏性的病理改变,可能会导致应用外科手术。纤维化或梗死的可能发生,并可能影响异位心脏移植的组织和嵌入式船只,使它们不适合用于评估。

由于其规模和宪法,主动脉是一个理想的主题,在血管壁的三层同心内膜增厚的程度,如心肌细胞坏死,在每个人简单而准确的调查形态学,生物化学和分子重塑媒体或细胞因子和生长因子的合成增加。

主动脉移植物产生免疫反应的确是足以引发慢性移植的改建,但不足以诱发急性排斥反应(2)发现。得益于这种移植的中间免疫原性,丢失没有移植急性排斥反应和没有初始与CsA的免疫抑制治疗是必需的。该模型,从而使调查没有影响或预防性免疫抑制异位心脏移植手术(2,4)经常出现掺假的药物对慢性移植血管病变的初步成效。

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Disclosures

没有利益冲突的声明。

Acknowledgments

作者感谢她的组织学工作的克里斯蒂安Pahrmann。

资助

宋佳Schrepfer已收到由德意志研究联合会(DFG)(SCHR992 / 3 1和SCHR992/4-1)的研究补助金。]

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Surgical microscope (magnification 25x)
Isoflurane
shaver
Provo-Iodine
ice cold 0.9% saline
prewarmed 0.9% sterile saleine
eye ointment
glove
microsurgical scissirs
forceps
clamps
8-0 suture (prolene)
6-0 suture (prolene)
5-0 suture (prolene)
Carprofen
Metamizol
Q-tips

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References

  1. Deuse, T., Hoyt, G., Koyanagi, T., Robbins, R. C., Schrepfer, S. Prevention and Inhibition But Not Reversion of Chronic Allograft Vasculopathy by FK778. Transplantation. 85, 870-877 (2008).
  2. Mennander, A., Tiisala, S., Halttunen, J., Yilmaz, S., Paavonen, T., Hayry, P. Chronic rejection in rat allografts. An experimental model for transplant arteriosclerosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 11, 671-680 (1991).
  3. Ono, K., Lindsey, E. S. Improved technique of heart transplantation in rats. J Thorac Cardiovasc Surg. 57, 225-225 (1969).
  4. Poston, R. S., Billingham, M., Hoyt, E. G. Rapamycin reverses chronic graft vascular disease in a novel cardiac allograft model. Circulation. 100, 67-100 (1999).
  5. Schrepfer, S., Deuse, T., Koch-Nolte, F., Krieger, T., Haddad, M., Schäfer, H., Pelletier, M. P., Robbins, R. C., Reichenspurner, H. FK778 in Experimental Xenotransplantation: A Detailed Analysis of Drug Efficacy. J Heart Lung Transplant. 26, 70-77 (2007).
主动脉原位移植大鼠模型,研究慢性血管病变的发展
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Stubbendorff, M., Deuse, T., Hammel, A., Robbins, R. C., Reichenspurner, H., Schrepfer, S. Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy. J. Vis. Exp. (46), e1989, doi:10.3791/1989 (2010).More

Stubbendorff, M., Deuse, T., Hammel, A., Robbins, R. C., Reichenspurner, H., Schrepfer, S. Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy. J. Vis. Exp. (46), e1989, doi:10.3791/1989 (2010).

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