Summary
هذا الفيديو يوضح زرع الشريان الأبهر مثلي النموذج بوصفه نموذجا بسيطا لدراسة تطور اعتلال وعائي زرع (TVP) في الفئران.
Abstract
النماذج البحثية الرفض المزمن ضرورية للتحقيق في العمليات الفيزيولوجية المرضية وpathobiological خلال تطوير زراعة اعتلال وعائي (TVP).
النموذج الحيواني تستخدم عادة لدراسات القلب والأوعية الدموية الرفض المزمن هو زرع قلب منتبذ نموذج القوارض التي أجريت في المختبر. ويستخدم هذا النموذج على نطاق واسع في التجارب منذ أونو وليندسي (3) نشرت تقنيتهم. لتحليل النتائج في الأوعية الدموية والقلب يجب أن يكون مقطوع وجميع السفن التي يجب أن تقاس.
طريقة أخرى للتحقيق في رفض مزمن في القلب والأوعية الدموية التساؤلات هو النموذج زرع الشريان الأبهر (1 ، 2). في النموذج الأبهر زرع مثلي ، يمكن بسهولة أن يتم تقييم تشريحيا الأبهر (2). نموذج PVG إلى المجلس الدولي للمطارات هي مفيدة بشكل خاص للدراسات CAV ، منذ رفض الأوعية الدموية الحادة ليست عاملا رئيسيا التباس وسيكلوسبورين والعلاج (CSA) لا تمنع تطور CAV ، على غرار ما نجد في الإعداد السريرية (4 ). مطلوب A7 يوما فترة CSA في هذا النموذج لمنع الرفض الحاد وتحقيق البقاء على المدى الطويل مع تطوير TVP.
ويمكن أيضا أن يستخدم هذا النموذج للتحقيق في الرفض الحاد الخلوية ونخر وسائل الاعلام في نماذج أعضاء غير بشرية (5).
Protocol
يتم شراؤها الفئران وزنها حوالي 250 300g من نهر تشارلز (7 Sandhofer خبراء المياه ، D - 97633 Sulzfeld).
يتم إجراء عمليات زرع باستخدام الفئران PVG الجهات المانحة ، والجرذان ACI كمتلقين.
ويعيش في ظل ظروف الجرذان التقليدية ، تغذية الفئران القياسية طعام وماء libidum الإعلانية.
يتم تعقيم جميع الأدوات الجراحية قبل الاستخدام.
إعداد المانحة :
تخدير الفئران مع isoflurane (2،5-3 ٪) باستخدام غرفة التعريفي.
- حلق الشعر في البطن والصدر ، ووضع فأر على ظهرها ووضع قناع على الأنف والفم والخمسين للحفاظ على التخدير.
- تطهير منطقة البطن والصدر به على نطاق واسع ، بروفو اليود ، واستخدام الايثانول 80 ٪ المقبل ، كرر هذه الخطوة ثلاث مرات.
- فحص ردود الفعل معسر القدمين الخلفيتين للتأكد من أن الفئران يكفي anesthesized.
- يستنزف على الفئران عن طريق فتح البطن وقطع حفرة في الشريان الأورطي البطني.
- فتح القفص الصدري بعناية للعثور على الأبهر الصدري النازل.
- تشريح الشريان الأورطي الصدري من الأنسجة المحيطة مثل الأعصاب ، والدهون والمريء.
- سحب قطعة 1.5cm من الشريان الأورطي باستخدام couter ، دون تلف الأنسجة من الشريان الأورطي.
- يروي الكسب غير المشروع تماما مع الأبهر العقيمة المالحة الباردة وتخزين الكسب غير المشروع في 4 درجات مئوية.
المتلقي :
تخدير الفئران مع isoflurane (2،5-3 ٪) باستخدام غرفة التعريفي. يتم الاحتفاظ درجة حرارة الجسم أثناء العملية الجراحية.
- حلق منطقة البطن وتطبيق مرهم العين لمنع جفاف العين من خلال التخدير.
- وضع فأر على ظهرها ووضع قناع على الأنف والفم والخمسين للحفاظ على التخدير.
- تطهير منطقة البطن باستخدام بروفو ، اليود ، واستخدام الايثانول 80 ٪ المقبل ، كرر هذه الخطوة ثلاث مرات.
- فحص ردود الفعل معسر القدمين الخلفيتين للتأكد من أن الفئران يكفي anesthesized.
- إجراء شق البطن خط الوسط التي تفصل بين الجلد والعضلات في خطوتين لفتح البطن.
- وضع الامعاء في درجة حرارة المياه المالحة قفاز مسحوق رطب الحرة. طوى القفازات حول الامعاء لمنع فقدان الرطوبة.
- إزالة الأنسجة الدهنية التي تغطي الشريان الأورطي البطني.
- تشريح الشريان الأورطي شكل المنطقة infrarenal إلى التشعب ، الحرص على عدم التسبب في الضرر على فروع السفن.
- إذا ligate فروع اللازمة من الشريان الأبهر.
- أول استخدام المشبك المجهرية على جزء من الشريان الأورطي infrarenal تشريح لوقف تدفق الدم.
- المقبل ، وضع المشبك ثان قريب من التشعب من الشريان الأورطي.
- والآن بعد أن توقف تدفق الدم ، وإزالة قطعة قصيرة من الشريان الأورطي.
- تأخذ طعم أبهري المانحة ، التي تم الاحتفاظ بها في المياه المالحة عقيمة 0،9 ٪ على الجليد ، وتقصير لمدة كافية ووضعه في هذه الفجوة.
- توصيل الشريان الأورطي المانحة إلى الشريان الأورطي المتلقي ، وأداء تشغيل باستخدام خيوط الدرز prolene 8-0 (Ethicon ، Norderstedt ، ألمانيا). تبدأ مع نهاية مفاغرة إلى نهاية الجمجمة.
- عند الانتهاء من القاصي نهاية إلى نهاية مفاغرة ، افتح بعناية المشبك القاصي.
- عندما لم يكن هناك نزيف بعد فتح المشبك البعيدة ، افتح بعناية المشبك الجمجمة. في حالة وجود نزيف في خياطة الجروح ، والمشبك إغلاق مرة أخرى ، وتحديد موقع النزيف ووقف النزيف باستخدام أحد غرزة واحدة.
- يجب أن يكون هناك نبض مرئية في نهاية البعيدة من الشريان الأورطي.
- الخطوة التالية في الأمعاء مرة أخرى في البطن.
- مسح البطن مع المالحة prewarmed العقيمة.
- إغلاق الطبقة العضلية للجدار البطن باستخدام 6-0 prolene الغرز تشغيل (Ethicon ، Norderstedt ، ألمانيا).
- استخدام prolene 5-0 (Ethicon ، Norderstedt ، ألمانيا) تشغيل الغرز لإغلاق الجلد.
- في حين أن الفئران لا يزال في التخدير ، وحقن تحت الجلد 4-5mg/kg كاربروفين.
- لتوفير ما يكفي من وعي لهذا النوع من الإجراء ، إضافة إلى metamizol مياه الشرب (50mg Metamizol في 100ML) لعلاج الألم لمدة 3 أيام بعد الزرع.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
لأسباب عدة وجدنا زرع الشريان الأبهر مثلي نموذج طريقة أكثر دقة لتحقيق تنمية TVP بالمقارنة مع النموذج زرع القلب منتبذ :
بخصوص تقنية جراحية ، ونموذج زرع الشريان الأبهر يجسد وسيلة ممكنة بسهولة ، الأمر الذي يتطلب فقط لإنجاز نهاية إلى نهاية مفاغرة ، في حين يمكن اعتبار عملية زرع قلب منتبذ نموذج تحديا أكثر تعقيدا وعرضة للخطأ لمهارات الجراح ق وتتطلب نهاية إلى الجانب مفاغرة على سفينتين الرئيسية.
ومما يسهل بشكل كبير تحليل وقياس العينات النسيجية منذ اعتلال وعائي ويمكن الاطلاع على زرع في سفينة واحدة واحدة يبلغ قطرها الوحيد تعريف بدلا من التنقيب عن العديد من السفن الصغيرة القلب تظهر مجموعة واسعة من حيث الحجم والتي يمكن أن الدستور عائقا المحقق في الحصول على هدف و مصداقية النتائج. قد الأبهر الصدري للمتلقي العادي بمثابة السيطرة ، وتقديم كائن سهلة وموثوقة المقارنة في القطر والمظهر المورفولوجي ، في حين أن نموذج زرع القلب منتبذ فمن الصعب مقارنة الأوعية القلبية أو شبه الكامنة وراء تفاوت كبير بين الأفراد.
بالإضافة إلى هذه النتائج ، allografts الأبهر ليست عرضة للتعديل والنسيجية التخريبية التي قد تنجم عن تطبيق إجراءات الجراحية. قد يحدث تليف أو احتشاء في وربما تؤثر على الأنسجة منتبذ زرع القلب والأوعية المدمجة ، مما يجعلها غير صالحة للتقييم.
نظرا لحجمها والدستور ، والشريان الأورطي هو الموضوع المثالي لتحقيق بسيطة والدقيق لإعادة تشكيل الصرفي ، والكيمياء الحيوية والجزيئية داخل كل واحدة من ثلاث طبقات في جدار الأوعية الدموية ، مثل درجة سماكة باطنة متحدة المركز ، نخر في خلية عضلية وسائل الإعلام أو التوليف زيادة السيتوكينات وعوامل النمو.
الاستجابة المناعية التي تم إنشاؤها بواسطة طعم خيفي الأبهر هو في الواقع ما يكفي لتحريك تغييرات مزمنة في عملية الزرع ، ولكن تم العثور على كافية للحث على حلقة الرفض الحاد (2). بفضل هذا استمناع المتوسطة من الكسب غير المشروع ، لا تفقد زرع الرفض الحاد لولا مناعة العلاج الأولي مع وكالة الفضاء الكندية هو مطلوب. نموذج يتيح بالتالي للتحقيق في الآثار الأولية للعقاقير على اعتلال وعائي طعم خيفي المزمنة دون تأثير أو غش من قبل المناعة الوقائية غالبا ما ينظر في عمليات زرع القلب منتبذ (2 ، 4).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
Acknowledgments
الكتاب أشكر كريستيان Pahrmann النسيجي لعملها.
التمويل
وقد تلقى سونيا Schrepfer منحة بحثية من جمعية الألمانية للبحوث (DFG) (SCHR992 3 / 1 وSCHR992/4-1).]
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Surgical microscope (magnification 25x) | |||
| Isoflurane | |||
| shaver | |||
| Provo-Iodine | |||
| ice cold 0.9% saline | |||
| prewarmed 0.9% sterile saleine | |||
| eye ointment | |||
| glove | |||
| microsurgical scissirs | |||
| forceps | |||
| clamps | |||
| 8-0 suture (prolene) | |||
| 6-0 suture (prolene) | |||
| 5-0 suture (prolene) | |||
| Carprofen | |||
| Metamizol | |||
| Q-tips |
References
- Deuse, T., Hoyt, G., Koyanagi, T., Robbins, R. C., Schrepfer, S. Prevention and Inhibition But Not Reversion of Chronic Allograft Vasculopathy by FK778. Transplantation. 85, 870-877 (2008).
- Mennander, A., Tiisala, S., Halttunen, J., Yilmaz, S., Paavonen, T., Hayry, P. Chronic rejection in rat allografts. An experimental model for transplant arteriosclerosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 11, 671-680 (1991).
- Ono, K., Lindsey, E. S. Improved technique of heart transplantation in rats. J Thorac Cardiovasc Surg. 57, 225-225 (1969).
- Poston, R. S., Billingham, M., Hoyt, E. G. Rapamycin reverses chronic graft vascular disease in a novel cardiac allograft model. Circulation. 100, 67-100 (1999).
- Schrepfer, S., Deuse, T., Koch-Nolte, F., Krieger, T., Haddad, M., Schäfer, H., Pelletier, M. P., Robbins, R. C., Reichenspurner, H. FK778 in Experimental Xenotransplantation: A Detailed Analysis of Drug Efficacy. J Heart Lung Transplant. 26, 70-77 (2007).
