Isolating adulten Stammzellen aus Muskel-Skelett Weichteile auf der Grundlage der Zelle Einhaltung Geschwindigkeit Kolben.
Adulte Stammzellen sind seit langem in Bezug auf ihre Anwendung in der regenerativen Medizin diskutiert. Adulte Stammzellen haben eine große Aufregung für die Behandlung von verletzten und erkrankten Geweben durch ihre beeindruckenden Fähigkeiten, um multi-lineage Zelldifferenzierung und ihre Selbst-Erneuerung unterzogen Fähigkeit generiert. Am wichtigsten ist, haben diese Eigenschaften machten sie vorteilhaft für die Verwendung bei der autologen Stammzelltransplantation Therapien. Das aktuelle Protokoll wird der Leser auf die veränderten Vorbeschichtungszyklus Technik, bei der Weichteile des Bewegungsapparates, zB Sehnen und Muskeln, sind 1 einführen<sup> St</sup> Enzymatisch gespalten und dann in Kollagen beschichtet Kolben mit Medium. Der Überstand, der mittleren und die restlichen schwimmenden Zellen zusammengesetzt ist, ist seriell übertragen täglich zu neuen Flaschen. Die Stammzellen sind die langsamsten auf die Kolben, welche dauert in der Regel beträgt 5-7 Tage (serielle Übertragungen oder preplates) einzuhalten. Durch den Einsatz dieser Technik, präsentieren adulten Stammzellen in diesen Geweben kann leicht durch relativ nicht-invasive Verfahren gewonnen werden.
Es wurde erkannt, dass einige adulten Geweben mehrere Stammzellen enthalten. In den letzten Jahren des Studiums, haben Stammzellen in das weiche Gewebe des Bewegungsapparates, einschließlich Skelettmuskel und Sehne festgestellt. Das aktuelle Protokoll Einzelheiten eines Verfahrens, wie die modifizierte Vorbeschichtungszyklus Technik, die bereits erfolgreich in unserem Labor verwendet werden, um adulte Stammzellen aus Sehnen und Skelettmuskulatur zu isolieren bekannt. Mit dem modifizierten Vorbeschichtungszyklus Technik…
The authors have nothing to disclose.
Die Autoren sind dankbar für die Frau Haiying Pan und Herr Ian Bellayr für die technische Hilfe auf Zellisolation für den aktuellen Filmen und Mr. Kyle Holden und Mr. Jonathan Lucas für ihre Hilfe auf Folie bearbeiten. Vielen Dank an die folgende Liste von Personen, die mit der Entwicklung der modifizierten Vorbeschichtungszyklus Techniken in den letzten Jahren beteiligt waren: Drs. Burhan Gharaibeh, Baohong Cao, Deasy Bridget, Thomas R. Payne, Aiping Lu, Hairong Peng, Hideki Oshima, Bo Zeng, Xiaodong Mu, Kimimasa Tobita, Ron Jankowski, Makato Ikezawa. Wir sind dankbar für die technische Unterstützung von James H. Cummins, Ryan Pruchnic, Joseph Feduska, Rebecca C. Schugar, Haiying Pan und Jessica Tebbets. Der Autor möchte auch die finanzielle Unterstützung für diese Arbeit von der Gesellschaft für Muskeldystrophie (MDA), der National Institutes of Health (NIH), das Department of Defense (DOD), dem Kinderkrankenhaus von Pittsburgh von UPMC, das Department of anerkennen Orthopädische Chirurgie und der University of Pittsburgh.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
DMEM | Invitrogen | #11995-073 | ||
FBS | Invitrogen | #10437-028 | ||
Heat-inactivated horse serum | Invitrogen | #26050-088 | ||
Chick embryo extract | Accurate Chemical | #CE650T-10 | ||
100U ml penicillin/streptomycin | Invitrogen | #15140-122 | ||
Dulbecco’s PBS | Invitrogen | #14190-250 | ||
Hank’s Buffered Salt Solution | Invitrogen | #24020-117 | ||
Collagenase type XI 0.2%(wt/vol) | Sigma-Aldrich | #C7657 | ||
Dispase2.4U ml | Invitrogen | #17105-041 | ||
Trypsin-EDTA0.5%(wt/vol) (10x;5g liter trypsin (1:250) | Invitrogen | #15400-054 | ||
Collagen for coating flask : Type I collagen derived from calf skin 0.1 g liter | Sigma-Aldrich | #C-9791 | ||
DMSO | Sigma | #D-2650 |