Allografting ortotópico intracraniana de Células Meduloblastoma em camundongos imunocomprometidos
Summary
Este protocolo descreve o isolamento e dissociação do mouse tecido meduloblastoma, e subsequente allografting das células tumorais em camundongos imunocomprometidos destinatário a fim de iniciar meduloblastoma secundário.
Abstract
Meduloblastoma é o tumor mais comum em idade pediátrica do sistema nervoso. Um grande número de estudos com animais tem se concentrado em precursores granulares do cerebelo neurônio (CGNPs) como a célula de origem para meduloblastoma 1-4. No entanto, as diversas apresentações clínicas de subtipos de meduloblastoma em pacientes humanos (nodular, desmoplásico, clássicos e grandes células / anaplásico), eo fato de que meduloblastoma é encontrado em um subgrupo de pacientes humanos com nenhuma expressão ectópica de CGNP marcador 5, sugerem que o origens celular e molecular de meduloblastoma são mais complexas e longe de ser completamente decifrado. Portanto, é essencial para determinar se existe um tumor meduloblastoma alternativa de células de origem com base em qual tipo de célula-modalidade terapêutica específica pode ser desenvolvida. Para este fim, ortotópico intracraniana allografting de organismos geneticamente marcadas tipos de células do tumor seguido por análises subseqüentes do desenvolvimento do tumor secundário em receptores permitirá a determinação da origem celular do tumor, iniciando células. Aqui nós descrevemos o protocolo experimental para ortotópico intracraniana allografting meduloblastoma de células derivadas do tecido do tumor primário, e esse procedimento também pode ser usado para o transplante de células de linhagens celulares estabelecidas.
Protocol
Discussion
Vários fatores críticos para garantir a célula meduloblastoma sucesso allografting que produz a formação de tumores secundários são os seguintes: Primeiro, use apenas Accutase 50% para o tecido dissociação e não mais de digerir o tecido como o tratamento enzimático prolongada leva à redução significativa da viabilidade celular. Também usar apenas o tamanho Pipetman 1 mL como dicas menores também podem gerar dano físico às células dissociadas. É bom ter uma mistura de células individuais e agregados …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este estudo foi suportado por concessões do Vanderbilt-Ingram Cancer Center de Suporte Grant (P30 CA068485), a Childhood Foundation tumor cerebral e os Institutos Nacionais de Saúde (NS042205).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Neurobasal medium | Invitrogen | 21103049 | ||
| hEGF | Invitrogen | PHG0311 | 25ng/ml | |
| bFGF | Invitrogen | PHG0023 | 25ng/ml | |
| N2 | Invitrogen | 17502048 | 1X | |
| B27(-RA) | Invitrogen | 12587010 | 1X | |
| Accutase | Invitrogen | A1110501 | 50% | |
| Glutamine | Invitrogen | 25030081 | 2mM | |
| Stereotaxic instrument | Stoelting | 51730 | ||
| Foredom flexible shaft drill, hang-up style | Stoelting | 58650 | ||
| Large probe holder | Stoelting | 51633 | ||
| 10 μL syringe, 26 ga., bevel tip | Stoelting | 51105 | ||
| Drill bit .75mm | Stoelting | 51455-3 |
References
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