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Biology

女性A.ネッタイシマカのモスキートへのdsRNAの注射

doi: 10.3791/215 Published: July 4, 2007

Summary

逆遺伝学的アプローチは、蚊のベクトルの病原体にどの遺伝子が基礎となる抵抗を決定するための非常に有用であることが証明されている。このビデオプロトコルは、デング熱ウイルスを抱いている女性A.ネッタイシマカ蚊、にdsRNAを注入するジェームズラボで使用される方法を示しています。 、注射針を校正インジェクションのセットアップを操作し、胸部にdsRNAを注入するための手法が例示される。

Abstract

逆遺伝学的アプローチは、蚊のベクトルの病原体にどの遺伝子が基礎となる抵抗を決定するための非常に有用であることが証明されている。このビデオプロトコルは、デング熱ウイルスを抱いている女性A.ネッタイシマカ蚊、にdsRNAを注入するジェームズラボで使用される方法を示しています。 、注射針を校正インジェクションのセットアップを操作し、胸部にdsRNAを注入するための手法が例示される。

Protocol

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  1. ガラスキャピラリーチューブを引いて、マイクロインジェクションの針を作る。我々は、サターインストゥルCO、(モデルP - 2000)からニードルプラーを使用。針の引き手のプログラムの仕様は以下のとおりです。

    熱:275
    FIL:3
    VEL:37
    デル:250
    PUL:125

  2. 針で水の体積が既知(例えば、1μl)をロードし、手動で微シャーピーとスケールをマーク。
  3. 蚊のためのポスト噴射カップを設定します。最初の1000μlのピペットチップの一番外側の先端を切断。その後、カップの側面に穴をカットし、カップのピペットチップの残りの部分を挿入します。カップの上にネットや蓋をする。
  4. 氷を持つ2つの発泡スチロールの箱を埋める。実体顕微鏡下で第1位アイスボックスを配置し、氷の上にガラスのwatchglassを置きます。
  5. アイスボックスの成人#2とCO 2と場所のカップを持つ大人の蚊を麻酔。
  6. dsRNAの注射のために針を準備します。注入ブロックのプラスチックホースにdsRNAを埋め針を刺します(射出ブロックの詳細については下記参照)。
  7. 鉗子でコップから時計皿に麻酔蚊を移動します。蚊キューティクルで注射針の先端を破る。この蚊を捨てる。
  8. 注射の場合、針は蚊の胸部に挿入されます。空いている手で、"安静時の位置"から"注射の位置"にインジェクタのバルブを調整し、dsRNAの所望の量が注入されるまでプランジャーを圧縮。
  9. ポスト噴射のカップに注入された蚊を置きます。

インジェクションのブロックは、設定する

  1. 軽量コンクリートブロックに50 mlの注射器を固定してください。
  2. 少なくとも2エアアウトレットと注射器の端に調節可能な1ウェイバルブを取り付けます。
  3. 1空気出口に密閉プラスチックホースを取り付けます。
  4. ホースの自由端にマイクロピペットアダプタを挿入します。

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女性A.ネッタイシマカのモスキートへのdsRNAの注射
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Luna, B. M., Juhn, J., James, A. A. Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos. J. Vis. Exp. (5), e215, doi:10.3791/215 (2007).More

Luna, B. M., Juhn, J., James, A. A. Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos. J. Vis. Exp. (5), e215, doi:10.3791/215 (2007).

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