Summary
وقد أثبتت عكس النهج الوراثية مفيدة للغاية لتحديد الجينات التي تشكل أساس المقاومة لمسببات الأمراض في ناقلات البعوض. هذا البروتوكول الفيديو يوضح الطريقة التي يستخدمها المختبر جيمس لحقن الرنا المزدوج الجديلة في بعوض أنثى البعوض A. ، التي تؤوي فيروس حمى الضنك. وتتجلى هذه التقنية لمعايرة حقن الابر ، والتلاعب الإعداد الحقن ، وحقن الرنا المزدوج الجديلة في القفص الصدري.
Abstract
وقد أثبتت عكس النهج الوراثية مفيدة للغاية لتحديد الجينات التي تشكل أساس المقاومة لمسببات الأمراض في ناقلات البعوض. هذا البروتوكول الفيديو يوضح الطريقة التي يستخدمها المختبر جيمس لحقن الرنا المزدوج الجديلة في بعوض أنثى البعوض A. ، التي تؤوي فيروس حمى الضنك. وتتجلى هذه التقنية لمعايرة حقن الابر ، والتلاعب الإعداد الحقن ، وحقن الرنا المزدوج الجديلة في القفص الصدري.
Protocol
- جعل الإبر microinjection عن طريق سحب أنابيب زجاجية الشعرية. نستخدم مجتذب إبرة من ثاني أكسيد الكربون آلات سوتر ، (النموذج P - 2000). مواصفات البرنامج إبرة مجتذب هي :
الحرارة : 275
الفيل : 3
فيل : 37
ديل : 250
بول : 125 - تحميل حجم معروفة (على سبيل المثال ، 1 ميكرولتر) من المياه في الإبر وعلامة يدويا النطاق مع sharpie الغرامة.
- إعداد فنجان بعد الحقن للبعوض. أول خفض غيض قصوى الخروج من غيض 1000 ماصة ميكرولتر. ثم ، وقطع حفرة في جانب من الكأس وإدراج الجزء المتبقي من رأس ماصة في الكأس. وضع الصافي أو غطاء على الجزء العلوي من الكوب.
- ملء مربعي الستايروفوم مع الثلج. مكان # 1 مربع الجليد تحت stereomicroscope ووضع الزجاج watchglass على الجليد.
- تخدير البعوض البالغ مع ثاني أكسيد الكربون (2) والكأس مكان مع الكبار في المربع الجليد # 2.
- إعداد إبرة لحقن الرنا المزدوج الجديلة. وضع إبرة مليئة الرنا المزدوج الجديلة على خرطوم من البلاستيك حقن كتلة (على وصف حقن كتلة أنظر أدناه).
- نقل بعوضة تخدير من الكأس على الزجاج ووتش مع ملقط. كسر غيض حقن ابرة في إهاب البعوض. تجاهل هذا البعوض.
- عن الحقن ، ويتم إدراج إبرة في الصدر من البعوض. بيدك الحرة ، وضبط صمام على محقن من "موقف يستريح" إلى "موقف الحقن" وضغط المكبس حتى يتم حقن كمية المطلوب من الرنا المزدوج الجديلة.
- حقن البعوض في مكان آخر لحقن الكأس.
حقن منع اقامة
- الإصلاح حقنة 50 مل إلى كتلة رماد.
- إرفاق تعديل 1 - الطريقة صمام في نهاية المحقنة مع منافذ الهواء على الأقل 2.
- إرفاق خرطوم بلاستيك محكم لمخرج الهواء 1.
- اضافة الى وجود محول micropipette في نهاية الحرة للخرطوم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
