Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Bayan A. aegypti Sivrisinek içine dsRNA enjeksiyon

doi: 10.3791/215 Published: July 4, 2007

Summary

Ters genetik yaklaşımlar sivrisinek vektör patojenler için hangi genlerin altta ya direncini belirlemek için son derece yararlı olduğu kanıtlanmıştır. Bu video protokolü James laboratuar tarafından dsRNA kadın dang virüs limanı A. aegypti sivrisinek, içine enjekte etmek için kullanılan bir yöntem gösteriyor. , Enjeksiyon iğneleri kalibre, enjeksiyon kurulum manipüle ve toraks içine enjekte dsRNA tekniği gösterilmiştir.

Abstract

Ters genetik yaklaşımlar sivrisinek vektör patojenler için hangi genlerin altta ya direncini belirlemek için son derece yararlı olduğu kanıtlanmıştır. Bu video protokolü James laboratuar tarafından dsRNA kadın dang virüs limanı A. aegypti sivrisinek, içine enjekte etmek için kullanılan bir yöntem gösteriyor. , Enjeksiyon iğneleri kalibre, enjeksiyon kurulum manipüle ve toraks içine enjekte dsRNA tekniği gösterilmiştir.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here
  1. Cam kılcal tüpler çekerek mikroenjeksiyon iğneler olun. Biz bir iğne çektirme, Sutter Enstrüman CO (Model P-2000) kullanın. İğne çektirmesi programın özellikleri şunlardır:

    ısı: 275
    Fil: 3
    vel: 37
    del: 250
    pul: 125

  2. Iğneler bilinen bir su hacmi (örneğin, 1 ul) yükleyin ve ince bir sharpie elle ölçek işareti.
  3. Sivrisinekler için bir enjeksiyon sonrası fincan kadar ayarlayın. İlk olarak 1000 ul pipet ucu kapalı dışarıdaki ucu kesilir. Sonra, bir fincan yan tarafına bir delik ve fincanda pipet kalan kısmını takın. Net veya kapak fincan üstüne koyun.
  4. Iki strafor kutulara buz ile doldurun. Place stereomicroscope altında buz kutusu # 1 ve buz üzerinde bir cam Dürbün yerleştirin.
  5. CO 2 ve buz kutusu # 2 yetişkin ile fincan yetişkin sivrisinek anestezisi.
  6. DsRNA enjeksiyon için iğne hazırlayın. (Enjeksiyon blok aşağıdaki açıklamayı görmek için), enjeksiyon blok plastik hortum dsRNA ile dolu iğne koyun.
  7. Fincan saat camı forseps ile bir anestezi sivrisinek hareket ettirin. Sivrisinek manikür enjeksiyon iğne ucu kırın. Bu sivrisinek atın.
  8. Enjeksiyon için iğne sivrisinek toraks içine eklenir. Serbest elinizle "dinlenme pozisyonu", "enjeksiyon pozisyonu" enjektörü valf ayarlamak ve piston dsRNA, istenilen miktarda enjekte edilmiş kadar sıkıştırabilirsiniz.
  9. Enjeksiyon sonrası kabına yerleştirin sivrisinek enjekte etti.

Enjeksiyon bloğu kurmak

  1. Bir kül engellemek için, 50 ml şırınga Fix.
  2. Şırınganın sonuna kadar en az 2 hava çıkışları ile ayarlanabilir bir 1-yollu vana takın.
  3. Hava geçirmez bir plastik hortum, 1 hava prize takın.
  4. Hortumun ucunu bir mikropipet adaptörü takın.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Bayan A. aegypti Sivrisinek içine dsRNA enjeksiyon
Play Video
PDF DOI

Cite this Article

Luna, B. M., Juhn, J., James, A. A. Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos. J. Vis. Exp. (5), e215, doi:10.3791/215 (2007).More

Luna, B. M., Juhn, J., James, A. A. Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos. J. Vis. Exp. (5), e215, doi:10.3791/215 (2007).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter