الدودة الخيطية درس مكثف<em> انواع معينة ايليجانس</emيمكن> المهندسة transgenically للتعبير عن الإنسان β اميلويد ببتيد (Aβ). المستحث في التعبير عن Aβ<em> C. ايليجانس</em> العضلات يؤدي إلى السريع ، والنمط الظاهري استنساخه الشلل التي يمكن استخدامها لرصد العلاجات التي تعدل سمية Aβ.
ويعتقد عموما تراكم الببتيد β اميلويد (Aβ) ليكون أساسيا في تحريض مرض الزهايمر ، ولكن الآلية ذات الصلة (ق) من السمية لا تزال غير واضحة. يترسب ايضا Aβ عضليا في العضل الهيئة إدراج ، وهو عضلي حاد الإنسان. يمكن أن تكون الدودة الخيطية ايليجانس انواع معينة درس مكثف المهندسة transgenically Aβ للتعبير عن الإنسان. بالاعتماد على الأنسجة أو توقيت التعبير Aβ ، يمكن الديدان المعدلة وراثيا والظواهر التي يمكن قياسها بسهولة بمثابة قراءة للخروج من سمية Aβ. على سبيل المثال ، والديدان وراثيا مع التعبير Aβ عموم العصبية جود عيوب هو التعلم النقابي (دوسانيه وآخرون 2009) ، في حين الديدان المعدلة وراثيا مع التأسيسية التعبير محددة العضلات تظهر تدريجيا ، والسن التي تعتمد على النمط الظاهري الشلل (لينك ، 1995 ؛ كوهين وآخرون 2006). جيم واحدة مفيدة بشكل خاص ايليجانس نموذج توظف طفرة حساسة للحرارة في mRNA نظام مراقبة لدرجات الحرارة مهندس محرض التعبير العضلات من التحوير Aβ ، مما أدى إلى النمط الظاهري الشلل استنساخه على التروس درجات الحرارة (وصلة وآخرون 2003). العلاجات التي سمية Aβ العداد في هذا النموذج [على سبيل المثال ، التعبير عن التحوير واقية (حسن وآخرون 2009) أو التعرض لالجنكه بيلوبا مقتطفات (وو وآخرون 2006)] بتكاثر تغيير معدل الشلل الناجم عن الحرارة التروس هذه المعدلة وراثيا الديدان. هنا نحن لدينا وصف بروتوكول لقياس نسبة الشلل في هذا جيم المعدلة وراثيا ايليجانس النموذج ، مع إيلاء اهتمام خاص للمتغيرات التجريبية التي يمكن أن تؤثر على هذا القياس.
ويمكن للبروتوكول وصفناها استخدامها بفعالية لفحص آثار سمية المركبات على Aβ. نشرت الأمثلة تشمل آثار المكونة الجنكه بيلوبا انتزاع (وو وآخرون 2006) وريزيربين (آريا آخرون 2009). كما تم المركبات التي تم واقية ضد سمية Aβ في أنظمة أخرى أظهرت أن تكون وقائية في هذا النموذج (على سبيل المثال ، memantine ، نتائجنا غير منشورة). والأساس المنطقي لإنشاء مهمة هذا النموذج هو أن الأدوات المتطورة الوراثية والجزيئية المتاحة في C. ويمكن استخدام آليات للتحقيق في ايليجانس سمية Aβ. وبالتالي ، يمكن أن يعاير الطفرات آثار محددة على Aβ سمية (على سبيل المثال ، فإن تأثير الحد الذي يشبه الانسولين عن طريق إدخال إشارة DAF – 2 – فقدان وظيفة من الطفرات وفلوريز ، مكلور وآخرون 2007) ، وهذا النموذج يمكن أيضا يمكن استخدامها لدراسة آثار الإفراط في التعبير عن الجينات المحورة (فونتي وآخرون 2008). لقد قمنا مؤخرا الاستخدام الواسع النطاق لهذا النموذج لدراسة الآثار المترتبة على سمية واحدة استبدال الأحماض الأمينية في Aβ (بيانات غير منشورة).
وصف النموذج المعدلة وراثيا هنا المقايسات تأثير التعبير Aβ الحاد على وظيفة الخلايا العضلية. في ذلك الوقت من خلايا العضلات والشلل قسيم عضلي هم سليمة ، والشلل هو النمط الظاهري ليست نتيجة لموت الخلايا العضلية. ومع ذلك ، بعد الشلل (~ 48 ساعة بعد تغيير التروس الأولي) أن هناك توزيعا للسلامة العضلات والموت في نهاية المطاف من الديدان. نحن لم نحقق هذا الغرض المصب التعبير Aβ أو استخدامه كعلامة السمية.
التعبير Aβ نموذج محرض صفها هنا ليست مناسبة للتحقيق في العلاجات التي تعدل تشكيل β اميلويد في حد ذاتها. على الرغم من أن الديدان المعدلة وراثيا مع التأسيسية Aβ شكل التعبير الودائع اميلويد كشفها بسهولة (فاي وآخرون 1998 ؛. رابط وآخرون 2001) ، والديدان وراثيا مع التعبير Aβ محرض ونادرا ما يكون الودائع اميلويد والنمط الظاهري الشلل يظهر مستقلة عن ترسب الأميلويد (دريك وآخرون. 2003). نتائجنا تتفق مع الرأي القائل بأن من السمية الحادة الناجمة عن النتائج التعبير Aβ من تراكم Aβ oligomeric القابلة للذوبان ، وليس ترسب الأميلويد.
The authors have nothing to disclose.
نود أن نشكر الأعضاء الحاليين والسابقين في المختبر وصله الذي ساعد في تطوير بروتوكولات الموصوفة هنا ، ولا سيما الجن فونتي ، الذي طور الإجراء الأصلي. وقد تم دعم هذا العمل من الجوائز من المعاهد الوطنية للصحة (AG12423) وجمعية الزهايمر (زينيث جائزة) لCDL
Reagents | Quantity/2L | Company/Catalogue # | Comments |
NaCl | 6g | Sigma-Aldrich / S9888 | |
Agar | 40g | Sigma-Aldrich / A7002 | |
Peptone | 5g | Sigma-Aldrich / P0556 | |
ddH2O | 2L | ||
1M CaCl2 | 2mL | 147.02mg/mL in ddH2O | |
Uracil | 2mL | 2mg/mL in ddH2O | |
Cholesterol | 2mL | 5mg/mL in ethanol (do not autoclave) | |
1M MgSO4 | 2mL | 246.5mg/mL in ddH2O | |
1M KPO4 | 50mL | 98mg KH2PO4.mL, 48mg K2HPO4/mL in ddH2O, pH | |
Erlenmeyer Flask | VWR |